[發明專利]一種磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3的定量分析試劑盒及其制備方法

有效

• 申請號: 201610104825.7
• 申請日: 2016-02-25
• 公開（公告）號: CN105759051B
• 公開（公告）日: 2018-12-18
• 發明（設計）人: 梁敏瑤
• 申請（專利權）人: 廣州科方生物技術股份有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/531
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3的定量分析試劑盒的制備方法，所述試劑盒包括如下：

(1)GPC3標準品；

(2)吖啶酯標記的磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3抗體溶液；

(3)偶聯有磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3抗體的納米磁微球溶液；

(4)發光液；

該試劑盒由如下步驟制得：

(1)GPC3標準品的制備：用標準品緩沖液將GPC3配制成0ng/mL、0.5ng/mL、2.0ng/mL、5.0ng/mL、20.0ng/mL、100.0ng/mL系列濃度；所述標準品緩沖液包括質量比為3％BSA、0.6％NaCl、0.1％TritonX-100或Tween20、0.05％Proclin-300、余量的0.2mol/L磷酸緩沖液，所述標準品緩沖液的pH為7.0；

(2)吖啶酯標記的磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3抗體溶液的制備：

①、取GPC3抗體溶于，pH為7.0濃度為0.2mol/L的磷酸緩沖液中，至終濃度為5mg/L；

②、向步驟①處理后的GPC3抗體溶液加入吖啶酯至吖啶酯終濃度為0.25mg/L，避光靜置10小時，收集標記有吖啶酯的GPC3抗體溶液；

(3)偶聯有磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3抗體的納米磁微球溶液的制備：

ⅰ、取GPC3抗體溶于，pH為5.0濃度為0.2mol/L的MES溶液中，至終濃度為5mg/L；

ⅱ、取1重量份納米磁微球，加入2重量份的偶聯劑一和3重量份偶聯劑二，置于磁微球混合器旋轉30分鐘，除去上清；再加入連接緩沖液洗滌納米磁微球，除去上清；所述偶聯劑一包括質量比為1％NHS和余量的濃度為0.2mol/L的pH為5.0的MES；所述偶聯劑二包括質量比為1％的EDC和余量的pH為5.0的0.2mol/L的MES溶液；所述連接緩沖液為pH為5.0的0.2mol/L MES溶液；所述納米磁微球為直徑為3μm、表面帶羧基的超順磁性的納米磁微球；

ⅲ、將ⅰ步驟處理后的GPC3抗體溶液和ⅱ步驟處理后的納米磁微球按質量比1:40混勻形成GPC3抗體納米磁微球混合液，放置磁微球混合器旋轉12小時，再用3倍GPC3抗體納米磁微球混合液的體積的包被緩沖液置換連接緩沖液；獲得偶聯有磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3抗體的納米磁微球溶液；所述包被緩沖液包括質量比為1％BSA、0.5％NaCl、0.1％TritonX-100或Tween20、0.05％Proclin-300以及余量的30mmol/L Tris-HCl，所述包被緩沖液pH為7.0。