[發明專利]一種提高基因編輯后綿羊胚胎成纖維細胞同源重組修復頻率的方法有效
| 申請號： | 201610104796.4 | 申請日： | 2016-02-25 |
| 公開（公告）號： | CN105671045B | 公開（公告）日： | 2018-11-13 |
| 發明（設計）人： | 皮文輝;周平;郭延華;王偉;黃蘭蘭;韓猛立;簡子健;王新華;劉守仁 | 申請（專利權）人： | 新疆農墾科學院 |
| 主分類號： | C12N15/113 | 分類號： | C12N15/113;C12N15/85;C12N15/87 |
| 代理公司： | 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245 | 代理人： | 關暢;白艷 |
| 地址： | 832000 新疆維*** | 國省代碼： | 新疆;65 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 提高 基因 編輯 綿羊 胚胎 纖維 細胞 同源 重組 修復 頻率 方法 | ||
1.抑制Lig4基因表達和/或活性的物質在制備促進離體綿羊胚胎成纖維細胞在基因編輯時進行同源重組修復產品中的應用；
所述抑制Lig4基因表達和/或活性的物質為用于干擾離體綿羊胚胎成纖維細胞中Lig4基因表達的siRNA；所述siRNA的核苷酸序列為序列表中序列3或序列4。
2.根據權利要求1所述的應用，其特征在于：
所述基因編輯為將經過特定位點剪切后外源DNA分子導入離體綿羊胚胎成纖維細胞中，使所述剪切后外源DNA分子在細胞中進行同源重組修復；
或所述基因編輯為將外源DNA分子同源重組到經過特定位點剪切后的離體綿羊胚胎成纖維細胞基因組上。
3.一種使離體綿羊胚胎成纖維細胞在基因編輯時進行同源重組修復頻率提高的方法，包括如下步驟：抑制離體綿羊胚胎成纖維細胞中Lig4基因表達的物質抑制進行基因編輯的離體綿羊胚胎成纖維細胞中Lig4基因表達，實現離體綿羊胚胎成纖維細胞在基因編輯時進行同源重組修復頻率提高；
所述抑制離體綿羊胚胎成纖維細胞中Lig4基因表達的物質為用于干擾離體綿羊胚胎成纖維細胞中Lig4基因表達的siRNA；
所述siRNA的核苷酸序列為序列表中序列3或序列4。
4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于：所述抑制進行基因編輯的離體綿羊胚胎成纖維細胞中Lig4基因表達為將用于抑制離體綿羊胚胎成纖維細胞中Lig4基因表達的物質導入所述進行基因編輯的離體綿羊胚胎成纖維細胞中。
5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于：
所述基因編輯為將經過特定位點剪切后外源DNA分子導入離體綿羊胚胎成纖維細胞中，使所述剪切后外源DNA分子在細胞中進行同源重組修復；
或所述基因編輯為將外源DNA分子同源重組到經過特定位點剪切后的離體綿羊胚胎成纖維細胞基因組上。
6.根據權利要求3-5中任一所述的方法，其特征在于：
所述使離體綿羊胚胎成纖維細胞在基因編輯時進行同源重組修復頻率提高為抑制進行基因編輯的離體綿羊胚胎成纖維細胞中Lig4基因表達的細胞同源重組修復頻率高于進行基因編輯的離體綿羊胚胎成纖維細胞的同源重組修復頻率。
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