[發明專利]一種煙曲霉素的提取方法

有效

• 申請號: 201610104785.6
• 申請日: 2016-02-25
• 公開（公告）號: CN105622593B
• 公開（公告）日: 2018-06-26
• 發明（設計）人: 薛曉鋒;吳黎明;倪輝;曹葳蕤;杜冰;趙柳微;王妙;張中印
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院蜜蜂研究所
• 主分類號: C07D407/04
• 分類號: C07D407/04
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 郝瑞剛

本發明提供一種煙曲霉素的提取方法，包括步驟：1)將煙曲霉素發酵液的pH值調節為1～6.0，用大孔樹脂吸附；2)吸附后的樹脂置于層析柱中，用質量濃度15～30％的乙醇水溶液清洗；3)用無水乙醇或質量濃度50～98％的乙醇水溶液洗脫樹脂，洗脫液經濃縮和干燥，得到煙曲霉素粗提品。本發明提出的提取方法，避免了傳統工藝中的多種溶劑萃取、反萃等工序，操作可靠性高且簡便，生產過程安全無污染、資源利用率高，生產成本低，又有利于環境保護，是一種綠色環保的提取煙曲霉素的方法。

技術領域

本發明屬于抗生素生產領域，具體涉及一種從發酵液中提取抗生素的方法。

背景技術

煙曲霉素(Fumagillin)由煙曲霉(Aspergillus fumigatus)的發酵培養液中分離得到具有多種活性的一種代謝產物。其結構式為：

這種物質具有抗生素活性，又有抑制血管生成作用，從而具有對腫瘤生長的治療作用。此外，煙曲霉素的一系列衍生物還具有抗擊瘧原蟲和孢子蟲的作用。在養蜂業中煙曲霉素的是非常有效的治療西方蜜蜂孢子蟲病(Nosema apis)的藥物，在美國和加拿大等國家已經使用有近60年的歷史。近些年研究顯示，煙曲霉素還是潛在減肥藥物，是治療肥胖的有效藥物。作為一種具有多種活性的藥物，煙曲霉素在未來的使用更加廣泛。因此，建立簡單有效的煙曲霉素的提取和凈化方法，制備煙曲霉素純品，對于該藥物的深入研究和利用有著重要的意義。

由于煙曲霉素結構復雜，用有機合成的方法成本高，因此，目前煙曲霉素大多數從煙曲霉素的發酵液中提取和純化獲得。之前的專利和文獻中主要使用液液萃取的方法來從發酵液中提取煙曲霉素，提取過程中大量使用二氯甲烷或氯仿，叔丁醇，丙酮和乙酸乙酯等有毒試劑，同時提取過程中大量的副產物比如高毒的膠霉毒素等需要經過重結晶等方法除去，步驟繁瑣，不易控制。隨著人們對環境保護和人體健康的認識，通過優化提取方法，使用低毒、低污染的方法來提取藥物成為藥物提純的趨勢。大孔樹脂提取作為一種有效的提取方法，已經廣泛的應用到活性物質和藥物提取和純化中。

發明內容

針對現有技術的不足之處，本發明要解決的技術問題是提供一種操作簡單，宜于工業化生產的煙曲霉素提取方法。

實現本發明上述目的的技術方案為：

1、一種煙曲霉素的提取方法，包括步驟：

1)將煙曲霉素發酵液的pH值用鹽酸、硫酸、磷酸中的一種調節為1～6.5，用非極性大孔樹脂或弱極性大孔樹脂吸附，所用大孔樹脂的孔徑為比表面積為100～1200m²/g，大孔樹脂使用前用乙醇和水活化；

2)吸附后的樹脂置于層析柱中，用質量濃度15～30％的乙醇水溶液清洗；

3)用無水乙醇或質量濃度50～98％的乙醇水溶液洗脫樹脂，洗脫液經濃縮和干燥，得到煙曲霉素粗提品。

大孔樹脂使用前的活化是用無水乙醇浸沒樹脂浸泡20～30h，再用3倍的水清洗。

作為本發明優選技術方案之一，所述步驟1)中，向煙曲霉素發酵液的pH值調節為1～6.0，加入大孔樹脂，發酵液和大孔樹脂的體積質量比為15～20mL：1g；；攪拌后過濾，過濾得到的樹脂用水清洗。

或，所述步驟1)中，將煙曲霉素發酵液離心，分離出上清液，將上清液的pH值調節為1～6.0，活化后的樹脂置于層析柱中，上清液以0.5～3倍床層體積/小時的速度流過層析柱。

其中，所述層析柱的高徑比為1～10。

進一步地，所述大孔樹脂的型號為D101，XAD-2，HP-20，SP825，SP850或SP700。

其中，所述步驟2)中乙醇水溶液流過層析柱的速度為0.5～3倍床層體積/小時。