[發(fā)明專利]一種水線草中耳草酮A的提取分離方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610103824.0
• 申請日: 2016-02-25
• 公開（公告）號: CN105713005B
• 公開（公告）日: 2018-08-14
• 發(fā)明（設計）人: 林麗美;廖端芳;夏伯候
• 申請（專利權）人: 湖南中醫(yī)藥大學
• 主分類號: C07D493/04
• 分類號: C07D493/04;A61P35/00
• 代理公司: 北京路浩知識產(chǎn)權代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君

本發(fā)明涉及一種水線草中耳草酮A的提取分離方法，包括將水線草用醇溶劑進行提取，分別用石油醚、正丁醇、乙酸乙酯反復多次萃取；濃縮得精提浸膏；甲醇超聲溶解，過濾，濾液經(jīng)正相硅膠柱層析，然后采用柱層析分離法或制備液相分離法或刮板法進一步純化，得到耳草酮A。本發(fā)明方法分離水線草中耳草酮A成分的產(chǎn)率高，方法簡便快捷，純度高；所得耳草酮A可用于制成抗腫瘤的輔助藥物，為研發(fā)抗癌藥物提供一定的應用價值。

技術領域

本發(fā)明涉及中藥提取分離技術領域，具體涉及一種水線草中耳草酮A的提取分離方法。

背景技術

腫瘤是嚴重威脅人類生命的的重大疾病。據(jù)統(tǒng)計，惡性腫瘤已成為城鄉(xiāng)居民的首要死因，而且呈現(xiàn)年輕化合逐年上升趨勢，全國癌癥的平均5年存活率僅為25％左右，可見腫瘤的預防和治療十分迫切。藥物治療是腫瘤的主要治療手段，雖然目前已經(jīng)開發(fā)了數(shù)十種抗腫瘤藥物，有效延長了患者生命或者提高了患者生存質量，但是腫瘤的藥物研究還是面臨著巨大挑戰(zhàn)，抗癌藥物多有細胞毒藥物，副作用多；而中藥有幾千年的人體毒性實驗的基礎，從天然產(chǎn)物中尋找高效低毒的抗腫瘤活性化合物一直是研究熱點。

水線草，又名傘房花耳草，為茜草科一年生草本植物，耳草屬植物水線草Hedyotiscorymbosa(L.)的干燥全草。苦、寒，入肺、大腸二經(jīng)；具有清熱解毒之功效，常用于燙傷，與常山、馬鞭草混合煎服能治瘧疾。目前臨床上，水線草的主要用途是與白花蛇舌草混用治療癌癥(南京新醫(yī)學院.中藥大辭典.上海.上海科學技術出版社,1977:535.)，但其抗腫瘤物質基礎尚不明確。

水線草中主要含的化學成分為環(huán)烯醚萜及其苷類和三萜酸類。耳草酮A、雞屎藤苷甲酯(雞矢藤苷甲酯)都為環(huán)烯醚萜類，從水線草中分離得到，且都不存在于白花蛇舌草中。2007年，研究者首次從水線草分離得到耳草酮A，現(xiàn)代研究從水線草中分離的耳草酮對P-多蛋白糖介導的多向性抗藥的人體肝細胞瘤逆轉時發(fā)現(xiàn)耳草酮能夠明顯地選擇性地抑制R-HepG2和HepG2增殖，而且對正常的人體肝細胞WRL-68沒有影響，表明耳草酮A有很好的抗腫瘤活性(Grace Gar-Lee Yue,Julia Kin-Ming Lee,Ling Cheng,Ben Chung-Lap Chan,LeiJiang,Kwok-Pui Fung,Ping-Chung Leung and Clara Bik-San Lau.(2012).Reversal ofP-glycoprotein-mediated multidrug resistance in human hepatoma cells byhedyotiscone A,a compound isolated from Hedyotis corymbosa.Xenobiotica,42(6):562-570.)。

目前尚未檢索到水線草中耳草酮A提取分離方法。

發(fā)明內容

本發(fā)明的目的是提供一種水線草中耳草酮A的提取分離方法。

為實現(xiàn)本發(fā)明目的，本發(fā)明采用以下技術方案：

一種水線草中耳草酮A的提取分離方法，包括以下步驟：

1)將水線草用醇溶劑進行提取，得到水線草醇提物；

2)將所得水線草醇提物分別用石油醚、正丁醇、乙酸乙酯反復多次萃取；取乙酸乙酯萃取部位，濃縮得精提浸膏；

3)將所述精提浸膏用甲醇超聲溶解，過濾，濾液硅膠拌樣后經(jīng)正相硅膠柱層析，用洗脫劑進行梯度洗脫，收集洗脫液；所述洗脫劑為石油醚-乙酸乙酯洗脫劑，和二氯甲烷-石油醚洗脫劑；

4)將步驟3)所得洗脫液采用柱層析分離法或制備液相分離法或刮板法進一步純化，制得耳草酮A；

所述柱層析分離法包括將步驟3)所得洗脫液采用葡聚糖凝膠柱層析，以甲醇作為洗脫劑進行洗脫，收集洗脫液，制得耳草酮A；