[發明專利]一種水線草中耳草酮A的提取分離方法

有效

• 申請號: 201610103824.0
• 申請日: 2016-02-25
• 公開（公告）號: CN105713005B
• 公開（公告）日: 2018-08-14
• 發明（設計）人: 林麗美;廖端芳;夏伯候
• 申請（專利權）人: 湖南中醫藥大學
• 主分類號: C07D493/04
• 分類號: C07D493/04;A61P35/00
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君

1.一種水線草中耳草酮A的提取分離方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)將水線草粉碎至60-80目，加入5-15倍重量的70％甲醇，攪勻，先超聲提取0.5-1h，然后回流提取1-3h，提取溫度為60-80℃；過濾；濾渣按上述方法再次進行超聲提取、回流提取；共提取三次，合并濾液，減壓濃縮，得到水線草醇提物；

2)將所得水線草醇提物分別用石油醚、正丁醇、乙酸乙酯反復多次萃取；取乙酸乙酯萃取部位，濃縮得精提浸膏；

所述石油醚萃取為將步驟1)所得水線草醇提物用石油醚萃取3-5次，所述水線草醇提物與石油醚的重量比例為1-3∶4-6；萃取后保留水部位；

所述正丁醇萃取為將所述水部位用正丁醇萃取3-5次，所述水部位與正丁醇的重量比例為1-3∶4-6；萃取后保留正丁醇萃取部位；

所述乙酸乙酯萃取為將所述正丁醇萃取部位用乙酸乙酯萃取3-5次，所述正丁醇萃取部位與乙酸乙酯的重量比例為1-3∶4-6；萃取后保留乙酸乙酯萃取部位；

3)將所述精提浸膏用3-5倍重量的甲醇超聲溶解，過濾，濾液硅膠拌樣后經100-200目正相硅膠柱層析，用洗脫劑進行梯度洗脫，收集洗脫液；

具體地，所述梯度洗脫包括以石油醚-乙酸乙酯為洗脫劑，分別以石油醚-乙酸乙酯體積比為7:1，5:1，2:1進行第一次梯度洗脫，收集石油醚-乙酸乙酯為5:1的洗脫液；再以石油醚-二氯甲烷為洗脫劑，分別以石油醚-二氯甲烷體積比為2:1，1:1，1:2進行第二次梯度洗脫，收集石油醚-二氯甲烷1:1的洗脫液；

4)將步驟3)所得第二次梯度洗脫液采用柱層析分離法或制備液相分離法或刮板法進一步純化，制得耳草酮A；

所述柱層析分離法包括將步驟3)所得洗脫液采用葡聚糖凝膠柱層析，以甲醇作為洗脫劑進行洗脫，收集洗脫液，制得耳草酮A；

或者所述柱層析分離法包括將步驟3)所得洗脫液經ODS反相柱層析，以甲醇作為洗脫劑進行洗脫，收集洗脫液，制得耳草酮A；

所述制備液相分離法包括將步驟3)所得洗脫液經0.22μm微孔濾膜過濾，取濾液進制備液相，以65％甲醇水為洗脫劑等度洗脫，制得耳草酮A；所述制備液相使用LC-3000高效液相Thermo C18(250×21.2mm)制備柱；

所述刮板法包括將步驟3)第二次梯度洗脫所得石油醚-二氯甲烷為1:1的洗脫液濃縮，通過在薄層硅膠板上點樣，進行洗脫定量，以正己烷:乙酸乙酯＝2:1為展開劑展開，置紫外光燈下檢視定位后，將在硬板薄層板上樣品區帶的吸附劑定量刮下，用溶劑進行洗脫、定量，制得化合物耳草酮。