[發明專利]一種用于蚋類昆蟲分類和鑒定的引物及其制備方法和應用在審
| 申請號： | 201610101978.6 | 申請日： | 2016-02-24 |
| 公開（公告）號： | CN105525028A | 公開（公告）日： | 2016-04-27 |
| 發明（設計）人： | 王剛;黃敏;黃波;張經常 | 申請（專利權）人： | 西北農林科技大學 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京方圓嘉禾知識產權代理有限公司 11385 | 代理人： | 董芙蓉 |
| 地址： | 712100 陜*** | 國省代碼： | 陜西;61 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 用于 昆蟲 分類 鑒定 引物 及其 制備 方法 應用 | ||
1.一種用于蚋類昆蟲分類和鑒定的引物，其特征在于，所述用于蚋類昆蟲 分類和鑒定的引物序列：
SEQIDNO：1TATGTACTACCATGAGGACAAATATC；
SEQIDNO：2AGCAAATAAAAAATATCATTC。
2.如權利要求1所述的用于蚋類昆蟲分類和鑒定的引物，其特征在于，所 述用于蚋類昆蟲分類和鑒定的引物片段370bp。
3.一種如權利要求1所述用于蚋類昆蟲分類和鑒定的引物的制備方法，其 特征在于，所述制備方法包括以下步驟：
步驟一，總DNA的提取，采用試劑盒法，用100μL洗脫液溶解提取的樣 品，采用核酸滴定儀測定提取DNA的濃度及純度，進行樣品檢測或者置于-20℃ 保存、備用；
步驟二，引物篩選，選出備選上游引物13條，下游引物13條，引物序列 SEQIDNO：1與SEQIDNO：2的組合；
步驟三，以所得基因組DNA為模板，利用上述兩對引物對基因組DNA中 的線粒體cytb基因進行PCR擴增；
步驟四，取適量的PCR擴增產物用瓊脂糖電泳檢測結果，經溴化乙錠染色 后于紫外燈下觀察，兩對引物擴增的片段大小分別為370bp，將得到的特異性 產物測序，利用Chromas2.4軟件讀取測序結果。
4.如權利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述PCR反應體系和條件 為：PCR反應體系為25μL，含2×PCRMastermix12.5μL，正/反向引物各 3μL，DNA模板2μL，含20～50ngDNA，ddH2O補足25μL；
PCR反應條件為：94℃下預變性2min；而后35個循環，每個循環包括 94℃變性30s，41-51℃退火30s，72℃延伸30s；最后72℃延伸5min。
5.如權利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述蚋類分子鑒定引物使 用1％瓊脂糖電泳檢測。
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