[發明專利]一種等溫核酸擴增的方法

在審

• 申請號: 201610101384.5
• 申請日: 2016-02-24
• 公開（公告）號: CN107119040A
• 公開（公告）日: 2017-09-01
• 發明（設計）人: 石超;馬翠萍;尚凡金;周美玲;張攀松;王一凡
• 申請（專利權）人: 青島艾菲生物技術有限公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 北京雙收知識產權代理有限公司11241
• 代理人: 陳磊,孫寧寧

1.一種等溫核酸擴增的方法，包括以下步驟：

(1)設計正向和反向兩條引物；

(2)所述正向引物與擴增靶核酸序列雜交，在聚合酶的作用下聚合延伸，得到擴增產物；

(3)步驟(2)得到的擴增產物在反應溫度下發生動態解離，使得反向引物與擴增產物雜交并延伸，得到兩條引物的擴增產物；

(4)步驟(2)、(3)反復循環，最終得到大量的擴增產物。

2.如權利要求1所述的一種等溫核酸擴增的方法，其特征在于：所述正向和反向引物的Tm值≥反應溫度，引物長度在15-30個核苷酸之間。

3.如權利要求1或2所述的一種等溫核酸擴增的方法，其特征在于：整個過程反應溫度恒定不變，所述反應溫度范圍為55-73℃。

4.如權利要求3所述的一種等溫核酸擴增的方法，其特征在于：所述反應溫度為65℃。

5.如權利要求1所述的一種等溫核酸擴增的方法，其特征在于：所述擴增的靶核酸序列可以是DNA序列或RNA序列。

6.如權利要求1或5所述的一種等溫核酸擴增的方法，其特征在于：所述靶核苷酸序列長度≤100bp。

7.如權利要求1所述的一種等溫核酸擴增的方法，其特征在于：所述方法還包括在反應體系中添加促進鏈交換反應的物質，所述促進鏈交換反應的物質為PEG-200或極高熱穩定單鏈結合蛋白。

8.如權利要求1所述的一種等溫核酸擴增的方法，其特征在于：所述聚合酶為在反應溫度下穩定的聚合酶。

9.如權利要求1或8所述的一種等溫核酸擴增的方法，其特征在于：所述聚合酶為沒有外切酶活性的聚合酶。

10.如權利要求1或8所述的一種等溫核酸擴增的方法，其特征在于：當靶核苷酸序列為RNA時，所述聚合酶具有反轉錄活性或反轉錄酶的酶反應溫度與聚合酶的反應溫度一致。