[發明專利]一種黃顙魚組織中N4-乙酰基-磺胺甲噁唑殘留標準物質的制備方法

有效

• 申請號: 201610100917.8
• 申請日: 2016-02-24
• 公開（公告）號: CN105699144B
• 公開（公告）日: 2018-09-25
• 發明（設計）人: 劉永濤;徐春娟;艾曉輝;余琳雪;宋雅琪;楊紅
• 申請（專利權）人: 中國水產科學研究院長江水產研究所
• 主分類號: G01N1/28
• 分類號: G01N1/28;G01N33/12
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務所 42001
• 代理人: 王敏鋒

1.一種黃顙魚組織中N⁴-乙酰基-磺胺甲噁唑殘留標準物質的制備方法，其步驟是：

A、選取60g～90g已確認不含磺胺甲噁唑和N⁴-乙酰基-磺胺甲噁唑的雌性黃顙魚，在水族箱內養一周，用于制備黃顙魚肌肉、肝臟、腎臟、鰓和卵巢組織中N⁴-乙酰基-磺胺甲噁唑殘留標準物質，淡水養殖條件，水溫為25℃～26℃，pH為7.9～8.1，連續充氣，溶解氧值≥5.0mg/L；

B、稱取0.84g磺胺甲噁唑溶解在5mL的二甲基甲酰胺中，再用水稀釋定容至100mL，配制成8.4mg/mL的磺胺甲噁唑溶液；

C、按60mg/kg黃顙魚體重的劑量口灌磺胺甲噁唑溶液，將口灌磺胺甲噁唑后的黃顙魚放在水族箱中觀察有無回吐，選擇沒有回吐的黃顙魚用于制備N⁴-乙酰基-磺胺甲噁唑殘留標準物質；

D、將沒有回吐的黃顙魚放入另一水族箱中，養殖過程中不飼喂任何飼料；

E、從水族箱中取養殖192h-240h后的黃顙魚，分別采集新鮮黃顙魚的背部肌肉、肝臟、腎臟、鰓和卵巢組織，將相同組織合并；

F、將采集新鮮黃顙魚的背部肌肉，去皮后切成塊，用高速勻質機將黃顙魚的肌肉勻質，制備出肌肉中N⁴-乙酰基-磺胺甲噁唑殘留標準物質，-20℃冷凍保存；

G、打開黃顙魚的鰓蓋，用采集新鮮黃顙魚的鰓弓和鰓絲于離心管中，將其剪碎后，用高速勻漿機將其勻質，-20℃冷凍保存；

H、采集新鮮黃顙魚的卵巢組織于離心管中用高速勻質機將黃顙魚的卵巢勻漿，制備出卵巢中N⁴-乙酰基-磺胺甲噁唑殘留標準物質，-20℃冷凍保存；

I、采集新鮮黃顙魚的肝臟、腎臟組織分別放于塑料封口袋中，將袋內肝臟和腎臟組織碾碎，分別制備出肝臟和腎臟中N⁴-乙酰基-磺胺甲噁唑殘留標準物質，-20℃冷凍保存；黃顙魚各組織中N⁴-乙酰基-磺胺甲噁唑定量分析方法如下：

J、將黃顙魚肝臟、腎臟、鰓、卵巢和肌肉標準物質樣品進行處理：分別稱取步驟F-I得到的肝臟、腎臟、鰓、卵巢和肌肉標準物質樣品，分別放到離心管中，加入50μL 1μg/mL的磺胺甲噁唑同位素內標：磺胺甲噁唑-d4，再加入5mL乙腈，振蕩30s，超聲2－4min，再加入1g無水硫酸鈉，振蕩30s，8000r/min離心4－6min，轉移上層液體到離心管中，再向殘渣中加入4mL乙腈，振蕩30s，8000r/min離心4－6min，合并兩次乙腈提取液于同一離心管中，置49－51℃氮吹儀上氮吹至干，加入1mL定容溶液溶解殘渣，振蕩30s，加入試劑A，振蕩30s，8000r/min，離心4－6min，棄去上層液體，下層液體過0.22μm聚醚砜水系濾頭過濾，獲得從肝臟、腎臟、鰓、卵巢組織中提取、凈化后含N⁴-乙酰基-磺胺甲噁唑供HPLC-MS/MS分析的液體；

K、HPLC-MS/MS的分析條件：色譜柱：Hypersil GOLD C18色譜柱；柱溫：34－36℃，流速：0.2mL/min；流動相：有機相為試劑B，水相為試劑C和試劑D的水溶液，梯度洗脫程序：有機相與水相初始的體積比為20:80，維持1min；從1min到3min，有機相與水相的體積比由20:80均勻變為45:55；從3.0min到7.5min，有機相與水相的體積比45:55不變；再從7.5min到7.6min，有機相與水相的體積比由45:55均勻變為20:80；7.6min到8.5min，有機相與水相的體積比維持20:80不變；進樣量10μL；

所述的試劑A是甲醇、乙腈、乙酸乙酯、正己烷、環己烷試劑中的任意一種；

所述的試劑B是乙腈、甲醇、乙醇、異丙醇、乙酸、甲酸試劑中的任意一種；

所述的試劑C是乙酸、甲酸、氫氟酸、氨水中的任意一種；

所述的試劑D是磷酸二氫銨、乙酸銨、甲酸銨、磷酸氫二銨中的任意一種；

L、離子化模式：大氣壓電噴霧離子源，正離子模式；檢測方式采用選擇反應監測模式；

噴霧電壓：3500V；蒸發氣溫度：48－52℃；鞘氣壓力35arb；輔助氣壓力5arb；碰撞氣及壓力：氬氣純度≥99.999，1.5m Torr；離子傳輸毛細管溫度：348－352℃；Q1PW0.7，Q3PW0.7。