[發明專利]一種Legumain響應釋放阿霉素緩釋納米制劑及制備方法與作為制備載體藥物的應用

有效

• 申請號: 201610100355.7
• 申請日: 2016-02-24
• 公開（公告）號: CN105727305B
• 公開（公告）日: 2018-09-07
• 發明（設計）人: 南開輝;林森;陳浩;李彤;謝佩玲
• 申請（專利權）人: 溫州醫科大學
• 主分類號: A61K47/64
• 分類號: A61K47/64;A61K31/704;A61K9/06;A61P35/00
• 代理公司: 溫州金甌專利事務所(普通合伙) 33237
• 代理人: 王堅強

一種Legumain響應釋放阿霉素緩釋納米制劑及制備方法與作為制備載體藥物的應用，本發明利用腫瘤組織高表達Legumain的生物學特性，制備Legumain響應的納米水凝膠，從而實現對腫瘤組織的雙重靶向效應（主動靶向和被動靶向），減少阿霉素對正常組織的次生傷害，本發明以透明質酸作為阿霉素藥物載體的基礎材料，透明質酸廣泛存在與生物體的正常組織中，相對其他外源材料，具有較高的生物相容性和安全性，腫瘤組織還高表達透明質酸受體，因此以透明質酸作為載體材料，還能進一步達到靶向的效果。

技術領域

本發明涉及基于透明質酸的環境因子響應型納米水凝膠藥物緩釋體系領域，具體涉及一種Legumain響應釋放阿霉素緩釋納米制劑及其制備方法與作為制備抗腫瘤藥物緩釋載體藥物的應用。

背景技術

阿霉素是一種常用的廣譜抗腫瘤化學藥物，然而，阿霉素作為一種強細胞毒性藥物，對正常組織（如心臟、肝、腎以及腫瘤周圍正常組織等）帶來不可逆轉的傷害。如何實現藥物靶向腫瘤組織，減少對正常組織的次生傷害，是惡性腫瘤藥物治療中的一大難點。由于惡性腫瘤組織具有“滲透和滯留增強效應”，納米尺度下的藥物-載體體系能夠透過腫瘤組織的新生血管壁而不能透過正常組織的血管壁，達到“被動靶向”腫瘤組織效果，增強藥物在腫瘤組織的聚集，從而減少對正常組織的傷害。然而，大量的研究表明這種僅僅依靠“被動靶向”效應，在實踐中往往很難達到實際需要的靶向效率。利用腫瘤組織自身及其微環境的生物學特性（如低PH值，高還原勢，過表達葉酸受體等），制備環境因子響應型納米藥物載體，達到對腫瘤組織“主動”和“被動”雙重或多重靶向效應，能夠極大提高藥物在腫瘤組織中的聚集，從而提高藥物治療的效果。Legumain是哺乳動物中唯一的特異性水解天冬酰胺殘基的酶，研究表明Legumain在許多惡性腫瘤及腫瘤相關細胞中高表達，可作為惡性腫瘤藥物靶向設計的新靶點。以往利用腫瘤組織高表達Legumain蛋白酶特性的藥物緩釋體系包括將藥物與Legumain底物肽段直接相連，并在肽段另一端連接細胞膜不透性因子，從而使藥物只能Legumain高活性的腫瘤組織中才能透過細胞（如PCT）。但這種設計的產物仍然是小分子藥物，不具有納米尺度下藥物-載體體系的被動靶向效應，也沒有在機體中長時間緩釋的效果。

發明內容

為了解決現有技術的不足，本發明提供了一種Legumain響應釋放阿霉素緩釋納米制劑及其制備方法與作為制備抗腫瘤藥物緩釋載體藥物的應用，本發明利用腫瘤組織高表達Legumain的生物學特性，制備Legumain響應的納米水凝膠，從而實現對腫瘤組織的雙重靶向效應（主動靶向和被動靶向），減少阿霉素對正常組織的次生傷害。

本發明采用的技術解決方案是：一種Legumain響應釋放阿霉素緩釋納米制劑，其化學結構式如下：

。

一種所述的Legumain響應釋放阿霉素緩釋納米制劑的制備方法，所述的方法包括以下步驟：

（1）阿霉素的多肽衍生物合成：按以下用量比例，稱取Dox· HCl 1mmol和Fmoc-A-A-N(Trt)-L-OH(即PEP) 1mmol溶于50ml DMF中，加入2mmol DIPEA后，室溫，避光條件下磁力攪拌15min，加入1.2mmol HATU溶液,溶于2mlDMF中，室溫，避光條件下攪拌4h，然后將反應置于-20℃冷凍條件下使反應停止，再置于MWCO=100-500的透析袋內透析，產物冷凍干燥，加入20% 哌啶反應5min去除Fmoc保護基團形成DOX-LN(Trt)AA –NH2（也即DOX-PEP–NH2），然后調節PH值至7.0，并用MWCO（截留分子量）=100-500的透析袋內透析去除小分子副產物，凍干；

（2）產物分離純化：將步驟（1）產物用甲醇復溶，用Sephadex LH-20柱層析的方法分離純化，用甲醇做洗脫劑洗脫，收集組分，用硅膠板薄層色譜發觀測分離純化組分，所用的展開劑為比例是1:9的甲醇：乙酸乙酯，將相同組分合并，旋干之后加入少量超純水溶解，并冷凍干燥得到純的產物，進行結構解析；