[發(fā)明專利]一種Legumain響應釋放阿霉素緩釋納米制劑及制備方法與作為制備載體藥物的應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610100355.7
• 申請日: 2016-02-24
• 公開（公告）號: CN105727305B
• 公開（公告）日: 2018-09-07
• 發(fā)明（設計）人: 南開輝;林森;陳浩;李彤;謝佩玲
• 申請（專利權）人: 溫州醫(yī)科大學
• 主分類號: A61K47/64
• 分類號: A61K47/64;A61K31/704;A61K9/06;A61P35/00
• 代理公司: 溫州金甌專利事務所(普通合伙) 33237
• 代理人: 王堅強

1.一種Legumain響應釋放阿霉素緩釋納米制劑的制備方法，其特征在于，所述的方法包括以下步驟：

（1）阿霉素的多肽衍生物合成：按以下用量比例，稱取Dox?HCl 1mmol和Fmoc-A-A-N(Trt)-L-OH(即PEP) 1mmol溶于50ml DMF中，加入2mmol DIPEA后，室溫，避光條件下磁力攪拌15min，加入1.2mmol HATU溶液,溶于2mlDMF中，室溫，避光條件下攪拌4h，然后將反應置于-20℃冷凍條件下使反應停止，再置于MWCO=100-500的透析袋內(nèi)透析，產(chǎn)物冷凍干燥，加入20% 哌啶反應5min去除Fmoc保護基團形成DOX-LN(Trt)AA –NH2（也即DOX-PEP–NH2），然后調(diào)節(jié)PH值至7.0，并用MWCO=100-500的透析袋內(nèi)透析去除小分子副產(chǎn)物，凍干；

（2）產(chǎn)物分離純化：將步驟（1）產(chǎn)物用甲醇復溶，用Sephadex LH-20柱層析的方法分離純化，用甲醇做洗脫劑洗脫，收集組分，用硅膠板薄層色譜法觀測分離純化組分，所用的展開劑為比例是1:9的甲醇：乙酸乙酯，將相同組分合并，旋干之后加入少量超純水溶解，并冷凍干燥得到純的產(chǎn)物，進行結(jié)構(gòu)解析；

（3）透明質(zhì)酸嫁接阿霉素多肽衍生物：取0.1molMES與0.3molNaCl于試劑瓶中，加入1L超純水完全溶解，準備三個小燒杯，取200 ml的上步溶液于燒杯中，再分別取190mg 的透明質(zhì)酸（HA）于三個燒杯中，磁力攪拌48 hr至完全溶解；

（4）往燒杯中加入9.7 mg EDC和7.2 mg NHS反應15 min后，將24 mg Dox-PEP-NH2用DMF溶解后，加入到上述燒杯中，進行交聯(lián)反應，得到產(chǎn)物；

（5）將產(chǎn)物裝入MWCO=14000的透析袋，超純水透析，將透析袋中的產(chǎn)物取出預凍后，冷凍干燥得到HA-PEP-Dox，所述的HA-PEP-Dox的化學結(jié)構(gòu)式如下：

；

（6）載藥納米水凝膠制備：取100mg HA-PEP-Dox溶于20ml超純水中，加入0.1mol的HCl，磁力攪拌至HA-PEP-Dox完全溶解，再加入100mg ADH、120mg EDC、80ml液體石蠟和1ml司班80，用均質(zhì)機均質(zhì)乳化，乳化完成后避光靜置反應24h，反應結(jié)束后離心，上清加入150ml異丙醇，劇烈攪拌后離心收集沉淀，沉淀加入90% 異丙醇洗滌兩次離心收集沉淀，將沉淀合并后加水后置于-20℃條件下預凍，冷凍干燥得到產(chǎn)物，再加入20 mL三氟乙酸、20 mL二氯甲烷、800 uL三異丙基硅烷反應1 h 去除三苯甲基氨基保護基團，旋蒸去除二氯甲烷，和三氟乙酸，加水復溶，將產(chǎn)物裝入MWCO=14000的透析袋，超純水透析得最終產(chǎn)物。

2.據(jù)權利要求1所述的Legumain響應釋放阿霉素緩釋納米制劑的制備方法，其特征在于：所述的步驟（3）中透明質(zhì)酸（HA）的Mw=1300000 Da。

3.一種權利要求1所述的制備方法制備的Legumain響應釋放阿霉素緩釋納米制劑在制備抗腫瘤藥物中應用。