[發明專利]用于檢測亞洲型寨卡病毒的熒光RT-PCR引物和熒光探針、試劑盒及檢測方法

有效

• 申請號: 201610099248.7
• 申請日: 2016-02-23
• 公開（公告）號: CN105506188B
• 公開（公告）日: 2019-09-20
• 發明（設計）人: 黃超杰;朱海;游騰飛;付輝;盧和華
• 申請（專利權）人: 深圳市易瑞生物技術股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 深圳市科吉華烽知識產權事務所(普通合伙) 44248
• 代理人: 田亞軍;陳本發

本發明提供了一種用于檢測亞洲型寨卡病毒的熒光RT?PCR引物和熒光探針、試劑盒及檢測方法，所述用于檢測亞洲型寨卡病毒的熒光RT?PCR引物包括正向引物和反向引物，所述正向引物包括如SEQ ID NO：1所示的序列，所述反向引物包括如SEQ ID NO：2所示的序列；所述熒光探針為寡核苷酸探針，所述寡核苷酸探針包括如SEQ ID NO：3所示的序列。采用本發明的技術方案，通過引入特異性熒光探針和熒光信號的動態監測使PCR產物的擴增及分析的全過程在單管內封閉完成，具有實時、準確、快速、簡便的特點，無需后續處理，避免污染，為降低病死率以及控制疫情爭取時間。

技術領域

本發明屬于體外核酸檢測技術領域，本發明提供了一種用于檢測亞洲型寨卡病毒的熒光RT-PCR引物和熒光探針、試劑盒及檢測方法。

背景技術

寨卡病毒（Zika virus）是一種蚊媒病毒，于1947年首次在烏干達恒河猴中發現。屬黃病毒科黃病毒屬，為單股正鏈RNA病毒，直徑40-70nm，有包膜，包含10794個核苷酸，編碼3419個氨基酸。寨卡病毒與同為黃病毒屬的登革病毒、黃熱病毒及西尼羅病毒等存在較強的血清學交叉反應。寨卡病毒可引起一種自限性急性傳染病，稱為寨卡病毒病，臨床特征主要為發熱、皮疹、關節痛或結膜炎，極少引起死亡。世界衛生組織（WHO）認為，新生兒小頭畸形、格林-巴利綜合征（吉蘭-巴雷綜合征）可能與寨卡病毒感染有關。

寨卡病毒病主要在全球熱帶及亞熱帶地區流行。1952年，在烏干達和坦桑尼亞的人體中分離到該病毒。此后,多個國家有散發病例報道。2007年,首次在西太平洋國家密克羅尼西亞的雅普島發生寨卡病毒疫情暴發。截至2016年1月，至少在非洲、亞洲、美洲的45個國家有寨卡病毒傳播的證據，以巴西疫情最為嚴重。根據基因型別分為非洲型和亞洲型，2016年1月美洲流行的為亞洲型。

我國南方部分地區存在可傳播寨卡病毒的媒介伊蚊，近年來與之傳播方式相似的登革熱輸入性疫情持續增多，并在南方部分省份引起了較大規模的暴發疫情。隨著與相關國家或地區人員往來的日益密切，我國存在寨卡病毒輸入風險。特別是我國南方地區夏秋季節伊蚊密度較高，一旦有病例輸入，不排除在局部地區發生本地傳播擴散的可能。因此，急需建立一種快速、高效、準確的檢測方法和檢測試劑盒。

發明內容

針對以上技術問題，本發明提供了一種用于檢測亞洲型寨卡病毒的熒光RT-PCR引物和熒光探針、試劑盒及檢測方法，可以快速、高效、定性的檢測樣本中的亞洲型寨卡病毒。

對此，本發明的技術方案為：

一種用于檢測亞洲型寨卡病毒的熒光RT-PCR引物和熒光探針，所述用于檢測亞洲型寨卡病毒的熒光RT-PCR引物包括正向引物和反向引物，所述正向引物包括如SEQ ID NO：1所示的序列，所述反向引物包括如SEQ ID NO：2所示的序列，所述熒光探針為寡核苷酸探針，所述寡核苷酸探針包括如SEQ ID NO：3所示的序列。

正向引物：5'-AAAGGGAGCCTGGTGACATG-3'

反向引物：5'-CTGGGAGCCATGAACTGACA-3'

寡核苷酸探針：5'-AAGAGCATCCAGCCAGAGAATCTGG-3'。

作為本發明的進一步改進，所述正向引物還包括SEQ ID NO：1所示的序列的衍生序列；所述反向引物還包括SEQ ID NO：2所示的序列的衍生序列；所述寡核苷酸探針還包括如SEQ ID NO：3所示的序列的衍生序列；其中，所述衍生序列包括引物序列的互補鏈序列，或向5'端和3'端方向延伸一至十個以內的堿基或刪減一至十個以內的堿基得到的序列。

作為本發明的進一步改進，所述寡核苷酸探針的3’端標記有第一熒光淬滅基團，5’端標記有第一熒光報告基團。