[發明專利]鑒定香港巨牡蠣、有明牡蠣、太平洋牡蠣及其雜交種的微衛星引物和鑒定方法

有效

• 申請號: 201610098732.8
• 申請日: 2016-02-23
• 公開（公告）號: CN105624307B
• 公開（公告）日: 2020-02-14
• 發明（設計）人: 馬海濤;喻子牛;肖述;張揚;李軍
• 申請（專利權）人: 中國科學院南海海洋研究所
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12N15/11
• 代理公司: 44001 廣州科粵專利商標代理有限公司
• 代理人: 劉明星

本發明公開了鑒定香港巨牡蠣、有明牡蠣、太平洋牡蠣及其雜交種的微衛星引物和鑒定方法。所述的微衛星引物為：F:5’?CGACTGGTGGGAGTTTCTGAC?3’；R:5’?GCCGCTTCTATCTCCTTTGC?3’。由于牡蠣的外部形態常隨生活環境的不同而發生極大的變化，單純依靠形態特征往往難以鑒別；幼體階段的牡蠣根據形態特征更加難以區分。而利用本發明的微衛星引物，采用本發明的鑒定方法，可以快速、準確地鑒定出香港巨牡蠣、有明牡蠣、太平洋牡蠣個體，并且在三者間的雜交種個體鑒定中也具有潛在的應用價值，同時本發明具有方法簡單、結果直觀、準確有效、不受環境及發育時期影響、成本低廉等優點。

技術領域：

本發明屬于水產生物技術中的貝類分子標記和物種鑒定領域，具體涉及鑒定香港巨牡蠣、有明牡蠣、太平洋牡蠣及其雜交種的微衛星引物和鑒定方法。

背景技術：

微衛星DNA，又稱作短串連重復(STRs)、簡單重復序列(SSRs)、簡單序列長度多態性(SSLP)，是指基因組中以1～6個核苷酸為單位串聯組成的核苷酸序列。近年來，微衛星標記以其簡單高效等優點被廣泛應用于物種鑒定和雜交種分析。

牡蠣屬于軟體動物門、雙殼綱、珍珠貝目、牡蠣科，為全球性分布類群；牡蠣肉味鮮美、富含多種人體必需氨基酸，是一種重要的海洋生物資源，更是世界上最重要的海水養殖經濟類群之一，其養殖總產量和單位面積產量在所有的貝類養殖種類中位居首位。牡蠣也是中國產量最大的經濟貝類，其中具有較高經濟價值的香港巨牡蠣、有明牡蠣、太平洋牡蠣在中國已進行人工養殖。香港巨牡蠣(Crassostrea hongkongensis)喜歡生活在近河口或附近有淡水注入的地方，主要分布在浙江、福建、廣東、廣西、海南，年產量在100多萬噸。其肉柱肥大、肉質白嫩、味道鮮美，市場價格遠超過其它牡蠣品種。是暖溫性近岸生長的一個經濟價值極高的牡蠣類群，是我國南方養殖的主要經濟種。有明牡蠣(Crassostreaariakensis)在我國南北沿海均有分布，主要集中在廣東、廣西，分布于我國南北低鹽海。其肉味鮮美、營養豐富，是我國南方諸省的重要海水養殖經濟貝類，已有近兩百年的養殖歷史。太平洋牡蠣(Crassostrea gigas)分布在我國長江以北，為世界性養殖品種，主要集中在我國遼寧、山東等地，年產量近80萬噸。由于生長速度快、環境適應性強、肉味鮮美，深受廣大消費者青睞。牡蠣的外部形態常隨生活環境的不同而發生極大的變化，單純依靠形態特征往往難以鑒別。而牡蠣軟體部的解剖結構、染色體數目和核型差異很小，可提供的分類證據也很少。近年來，基于COⅠ、16S rDNA等線粒體基因和ITS序列差異的分子生物學被用于三者鑒定，但這些基因序列之間差異比較小，難以用電泳等簡單方法進行區分；HRM方法雖然簡單，但需要相關大型儀器支撐；而測序試驗周期較長，且花費較高。急需一種簡單高效的方法對香港巨牡蠣、有明牡蠣、太平洋牡蠣個體進行大規模物種鑒定。

另外隨著牡蠣養殖業對優良新品種需求的不斷增加，種間雜交研究在牡蠣間不斷進行，學者們陸續開展了香港巨牡蠣×太平洋牡蠣、香港巨牡蠣×有明牡蠣、太平洋牡蠣×有明牡蠣雜交組合的研究，并證明部分種間雜交牡蠣的精卵能夠結合，并正常發育。對獲得的雜交后代進行遺傳鑒定是很必要的，因為在牡蠣的種間雜交種經常會出現雌核發育、雄核發育、單倍體等現象。急需一種簡單方法對香港巨牡蠣、有明牡蠣、太平洋牡蠣的雜交個體進行分子鑒定。

發明內容：

本發明的目的是提供一種簡單、高效和精確的鑒定香港巨牡蠣、有明牡蠣、太平洋牡蠣及其雜交種的微衛星引物和鑒定方法。

本發明從150對香港巨牡蠣微衛星引物中篩選出的1對微衛星(SSR)引物，用其對香港巨牡蠣、有明牡蠣、太平洋牡蠣各90個個體的基因組DNA進行PCR擴增，通過擴增圖譜可以簡單高效的進行物種鑒定，另外對三者間的雜交種個體鑒定也有潛在應用價值，從而實現了本發明的目的。

本發明的鑒定香港巨牡蠣、有明牡蠣、太平洋牡蠣及其雜交種的微衛星引物，其特征在于，所述的微衛星引物(SSR引物Ch409)為：