[發明專利]鑒定香港巨牡蠣、有明牡蠣、太平洋牡蠣及其雜交種的微衛星引物和鑒定方法

有效

• 申請號: 201610098732.8
• 申請日: 2016-02-23
• 公開（公告）號: CN105624307B
• 公開（公告）日: 2020-02-14
• 發明（設計）人: 馬海濤;喻子牛;肖述;張揚;李軍
• 申請（專利權）人: 中國科學院南海海洋研究所
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12N15/11
• 代理公司: 44001 廣州科粵專利商標代理有限公司
• 代理人: 劉明星

1.一種香港巨牡蠣、有明牡蠣、太平洋牡蠣及其雜交種的鑒定方法，其特征在于，包括以下步驟：

提取牡蠣樣品的基因組DNA，以該基因組DNA作為模板，用微衛星引物進行PCR擴增，PCR產物進行凝膠電泳，然后分型判定；

如果PCR產物，若在308bp～347bp區間內出現1～2條條帶，則該牡蠣樣品為香港巨牡蠣，出現1條條帶說明該個體為純合子，出現2條條帶則說明該個體為雜合子；若在362bp～422bp區間內出現1～2條條帶，則該牡蠣樣品為有明牡蠣，出現1條條帶說明該個體為純合子，出現2條條帶則說明該個體為雜合子；若在206bp～242bp區間內出現1～2條條帶，則該牡蠣樣品為太平洋牡蠣，出現1條條帶說明該個體為純合子，出現2條條帶則說明該個體為雜合子；如果PCR產物同時在308bp～347bp區間和362bp～422bp區間內各出現1條帶，即同時擁有親本的1條特異性條帶的個體為香港巨牡蠣與有明牡蠣雜交子一代；如果PCR產物同時在308bp～347bp區間和206bp～242bp區間內各出現1條帶，即同時擁有親本的1條特異性條帶的個體為香港巨牡蠣與太平洋牡蠣雜交子一代；如果PCR產物同時在362bp～422bp區間和206bp～242bp區間內各出現1條帶，即同時擁有親本的1條特異性條帶的個體為有明牡蠣與太平洋牡蠣雜交子一代；

所述的微衛星引物為：

F:5’-CGACTGGTGGGAGTTTCTGAC-3’；

R:5’-GCCGCTTCTATCTCCTTTGC-3’。

2.根據權利要求1所述的鑒定方法，其特征在于，所述的以該基因組DNA作為模板，用權利要求1所述的微衛星引物進行PCR擴增，其PCR反應體系為：DNA模板50ng，Buffer 10mM，微衛星引物F和微衛星引物R各0.2mM，dNTP 0.2mM，Mg²⁺2.0Mm，Taq DNA聚合酶1U，用滅菌水補足25μL；反應程序為：94℃預變性5min；94℃變性30s，60℃退火30s，72℃延伸1min，30個循環；72℃延伸10min。