[發(fā)明專利]一種心腦血管疾病文庫(kù)構(gòu)建的試劑盒、方法及其應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610094510.9
• 申請(qǐng)日: 2016-02-19
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN105648067A
• 公開(kāi)（公告）日: 2016-06-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳勇;劉冬梅;王玲
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京樂(lè)普基因科技股份有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12Q1/68
• 分類(lèi)號(hào): C12Q1/68;C12N15/10;C40B50/06
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司 11332
• 代理人: 鞏克棟;侯瀟瀟

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及心腦血管疾病基因突變檢測(cè)技術(shù)，具體涉及一種心腦血管疾病文庫(kù)構(gòu) 建的試劑盒、方法及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

心腦血管疾病通常是指心臟血管和腦血管方面的疾病，一般是由于高脂血癥、血 液黏稠、動(dòng)脈粥樣硬化、高血壓等癥狀導(dǎo)致的心臟、大腦及全身組織發(fā)生缺血性或出血性疾 病。心腦血管疾病是一種嚴(yán)重威脅人類(lèi)健康的疾病，特別在中老年人群中發(fā)病率非常高?；? 因突變是該類(lèi)疾病發(fā)病的主要因素之一，而且具有高遺傳概率。攜帶突變基因的家族會(huì)通 過(guò)遺傳使得該基因得到廣泛傳遞，從而造成整個(gè)家族患病概率大幅增高。目前，由基因突變 造成的遺傳性心腦血管疾病患者已經(jīng)超過(guò)1000萬(wàn)人。心腦血管疾病具有隱匿性強(qiáng)，出現(xiàn)明 顯癥狀周期長(zhǎng)的特點(diǎn)，一旦疾病發(fā)作，臨床通常表現(xiàn)出異常兇險(xiǎn)的特點(diǎn)，如猝死、惡性心律 失常、心力衰竭、主動(dòng)脈破裂等。以往由于檢測(cè)技術(shù)不夠發(fā)達(dá)，缺乏早期診斷手段，發(fā)病時(shí)通 常已到疾病后期，很難挽救，所以被認(rèn)為是不治之癥。如果可以在發(fā)病早期對(duì)心腦血管疾病 進(jìn)行確診，臨床醫(yī)生則可以利用豐富的經(jīng)驗(yàn)預(yù)防和治療該類(lèi)疾病。

研究發(fā)現(xiàn)，心腦血管疾病的發(fā)生與ACTA2，CACNA2D1，DSC2，DSG2，DSP等熱點(diǎn)基因的 突變有很大的關(guān)系。ACTA2基因位于10號(hào)染色體長(zhǎng)臂上，由它編碼的肌動(dòng)蛋白α是成熟血管 平滑肌細(xì)胞中含量最多的蛋白，占血管平滑肌細(xì)胞內(nèi)總蛋白的40％以及總肌動(dòng)蛋白的 70％，由肌動(dòng)蛋白α構(gòu)成的細(xì)肌絲與粗肌絲周期性地相互作用而參與血管的舒縮過(guò)程，肌動(dòng) 蛋白α主要參與收縮過(guò)程。由此可見(jiàn)，它是收縮型血管平滑肌細(xì)胞的標(biāo)志性蛋白，而血管平 滑肌細(xì)胞由收縮表型向合成表型的轉(zhuǎn)化過(guò)程在冠狀動(dòng)脈病變中起非常重要的角色。 CACNA2D1基因，位于染色體7q21-22，負(fù)責(zé)編碼心臟L型鈣通道的α2δ-1亞單位。研究顯示 CACNA2D1基因是SQT6的致病基因，CACNA2D1基因突變會(huì)導(dǎo)致L型鈣通道的功能喪失，通過(guò)相 應(yīng)的機(jī)制引起AP復(fù)極化時(shí)間、ERP及QT間期縮短。在心肌中，組織的結(jié)構(gòu)和功能完整性需要 依靠橋粒的支持作用，而主要的橋粒蛋白有：橋粒斑蛋白(desmoplakin,DSP)，橋粒芯糖蛋 白(desmoglein,DSG)和橋粒芯膠蛋白(desmocollin,DSC)。DSG2和DSC2基因編碼的是跨膜 蛋白，在細(xì)胞間與相鄰的心肌細(xì)胞橋粒鈣粘素的通訊部分形成一種拉鏈樣二聚體。DSP基因 編碼的是最大的橋粒蛋白，其N(xiāo)末端與其它橋粒蛋白相連，C末端則與中間絲相連，它在維持 心肌細(xì)胞之間的結(jié)構(gòu)和功能完整性方面發(fā)揮重要的作用。

因此，高效、準(zhǔn)確的檢測(cè)判斷心腦血管疾病熱點(diǎn)基因突變就顯得極為重要，同時(shí)也 成為判斷患者能否適應(yīng)靶向藥物治療的關(guān)鍵。然而，目前還沒(méi)有關(guān)于采用高通量測(cè)序技術(shù) 檢測(cè)心腦血管疾病熱點(diǎn)基因突變的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的是提供一種心腦血管疾病文庫(kù)構(gòu)建的試劑 盒、方法及其應(yīng)用，所述試劑盒能夠快速有效的構(gòu)建心腦血管疾病的文庫(kù)，為心腦血管疾病 的快速檢測(cè)奠定了基礎(chǔ)

為達(dá)此目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：

第一方面，本發(fā)明提供了一種心腦血管疾病文庫(kù)構(gòu)建的試劑盒，所述試劑盒包括 針對(duì)ACTA2，CACNA2D1，DSC2，DSG2，DSP基因突變的檢測(cè)探針。

本發(fā)明中，所述ACTA2，CACNA2D1，DSC2，DSG2，DSP基因包括野生型、雜合型和突變 型。

本發(fā)明中，首次公開(kāi)通過(guò)高通量測(cè)序技術(shù)檢測(cè)心腦血管疾病熱點(diǎn)基因突變的試劑 盒，可以實(shí)現(xiàn)樣本DNA文庫(kù)構(gòu)建，通過(guò)獨(dú)特設(shè)計(jì)的特異性雜交文庫(kù)的探針引物序列和精準(zhǔn)性 的捕獲雜交文庫(kù)的磁珠懸浮液進(jìn)行整合，避免了DNA樣本的損失和污染，且降低了建庫(kù)需要 的基因組DNA樣本量。

優(yōu)選地，所述檢測(cè)探針的核苷酸序列包含如SEQIDNO.1-24所示的片段。

優(yōu)選地，所述SEQIDNO:1-5所示的序列是用于檢測(cè)ACTA2基因突變的檢測(cè)探針。

優(yōu)選地，所述SEQIDNO:6-9所示的序列是用于檢測(cè)CACBA2D1基因突變的檢測(cè)探 針。

優(yōu)選地，所述SEQIDNO:10-14所示的序列是用于檢測(cè)DSC2基因突變的檢測(cè)探針。

優(yōu)選地，所述SEQIDNO:15-18所示的序列是用于檢測(cè)DSG2基因突變的檢測(cè)探針。