[發明專利]一種心腦血管疾病文庫構建的試劑盒、方法及其應用

在審

• 申請號: 201610094510.9
• 申請日: 2016-02-19
• 公開（公告）號: CN105648067A
• 公開（公告）日: 2016-06-08
• 發明（設計）人: 陳勇;劉冬梅;王玲
• 申請（專利權）人: 北京樂普基因科技股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/10;C40B50/06
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司 11332
• 代理人: 鞏克棟;侯瀟瀟

1.一種心腦血管疾病文庫構建的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括針對ACTA2， CACNA2D1，DSC2，DSG2，DSP基因突變的檢測探針。

2.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述檢測探針的核苷酸序列包含如SEQ IDNO.1-24所示的片段；

優選地，所述SEQIDNO:1-5所示的序列是用于檢測ACTA2基因突變的檢測探針；

優選地，所述SEQIDNO:6-9所示的序列是用于檢測CACBA2D1基因突變的檢測探針；

優選地，所述SEQIDNO:10-14所示的序列是用于檢測DSC2基因突變的檢測探針；

優選地，所述SEQIDNO:15-18所示的序列是用于檢測DSG2基因突變的檢測探針；

優選地，所述SEQIDNO:19-24所示的序列是用于檢測DSP基因突變的檢測探針。

3.根據權利要求1或2所述的試劑盒，其特征在于，所述檢測探針標記有鏈霉親合素。

4.根據權利要求1-3中任一項所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括針對 ACTA2，CACNA2D1，DSC2，DSG2，DSP基因突變檢測的封閉引物；

優選地，所述檢測封閉引物的核苷酸序列包含如SEQIDNO.25-44所示的片段。

5.根據權利要求4所述的試劑盒，其特征在于，所述封閉探針以排列組合的方式隨機配 對成96種組合形式的雜交文庫。

6.根據權利要求1-5中任一項所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括：捕獲磁 珠懸浮液、PCR擴增引物和基因組DNA建庫試劑；優選地，所述捕獲磁珠懸浮液標記有生物 素；

優選地，所述PCR擴增引物是常規引物，所述PCR擴增引物包括正向引物和反向引物；

優選地，所述常規引物的核苷酸序列包含如SEQIDNO.1-2所示的片段。

優選地，所述PCR擴增引物的濃度為0.01-0.1mM，優選為0.02-0.5mM。

7.根據權利要求6所述的試劑盒，其特征在于，所述基因組DNA建庫試劑包括：0.02- 0.2MTris-HCl緩沖液、100-500μg/mLTaqDNA聚合酶、0.01-0.1M堿基A和0.1-0.5M接頭；

優選地，所述PCR擴增引物與所述接頭特異性結合。

8.一種利用如權利要求1-7中任一項所述的試劑盒用于構建心腦血管疾病高通量測序 文庫的方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)取待測樣品DNA片段化后加入建庫試劑孵育反應，構建測序文庫；

2)取構建好的文庫加入所述擴增引物進行PCR擴增反應；

3)取PCR擴增產物與所述檢測探針、檢測封閉引物混合，雜交孵育；

4)將雜交后的文庫與所述捕獲磁珠懸浮液混合孵育，捕獲雜交的文庫并洗滌；

5)將捕獲的雜交文庫中再加入所述擴增引物，進行PCR擴增并純化產物。

9.根據權利要求8所述的方法，其特征在于，步驟(1)所述的待測樣品為外周血、指尖血 或唾液中的任意一種或至少兩種的混合物。

10.一種如權利要求1-7中任一項所述的試劑盒、或權利要求8或9所述的方法用于檢測 心腦血管疾病的應用。