[發明專利]一種薏苡內生真菌及其應用

在審

• 申請號: 201610092344.9
• 申請日: 2016-02-19
• 公開（公告）號: CN105624047A
• 公開（公告）日: 2016-06-01
• 發明（設計）人: 秦路平;賈敏;楊陽;韓婷;辛海量;張巧艷;李義敏;孔周揚
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第二軍醫大學
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;A01N63/04;A01P21/00;C12R1/645
• 代理公司: 上海卓陽知識產權代理事務所(普通合伙) 31262
• 代理人: 周春洪

技術領域

本發明涉及微生物技術領域，特別涉及薏苡內生真菌及其在促進擬南芥或薏苡生長中的應用。

背景技術

薏苡(Coixlacryma-jobiL.var.mayuen.(Roman.)Stapf)屬于禾本科(Gramineae)，薏苡屬(CoixL.)植物，為中國藥典收載品種。營養價值極高，具有多種保健功效，是世界范圍內倍愛親睞的藥食兩用作物資源。薏苡是常用的中藥，有利尿、健脾、補肺、祛濕熱、消水腫、排膿、止瀉等功效。現代研究證明薏苡具有抗腫瘤、增強免疫力和抗炎作用。對薏苡的研究集中在對其化學成分、藥理活性、提取工藝和臨床應用等方面。目前，薏苡的生長主要依靠外源激素和化學肥料及土壤養分來維持，很大程度上限制了薏苡的生長周期和質量。雖然薏苡資源區域廣闊，且已進行大量的人工栽培；但是其分布星散，資源更新周期長，且人工栽培技術要求高，藥材質量參差各異。隨著薏苡眾多藥理活性的發現，其市場需求增大，通過直接采收薏苡天然和人工資源將不能滿足中藥材市場的需求。另一方面，通過施肥和化學試劑促進薏苡的生長也會影響薏苡的藥材質量，同時影響薏苡的臨床療效。因此，為薏苡人工種植添施內生真菌菌肥提供理論依據和技術支持已成為人們關注的課題。

發明內容

本發明的目的是針對現有技術中的不足，提供一種新的薏苡內生真菌。

本發明的再一的目的是，提供一種菌劑。

本發明的另一的目的是，提供如上所述薏苡內生真菌的用途。

為實現上述目的，本發明采取的技術方案是：

一種薏苡內生真菌，命名為香柱菌屬E.bromicola。所述的薏苡內生真菌是從禾本科薏苡屬植物薏苡(Coixlacryma-jobiL.var.mayuen(Roman.)Stapf)植物活體中采用內生真菌分離純化技術分離獲得的，經微生物分類學鑒定為香柱菌屬E.bromicola。該菌株已保藏，保藏日期為2015年11月27日，保藏號為CGMCCNo.11410，保藏單位為中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，地址：北京市朝陽區北辰西路1號院3號，郵編：100101。

所述薏苡內生真菌顯微形態為：在顯微鏡下可觀察到大量成熟的分生孢子，分生孢子橢圓形或腎形，單個頂生，分生孢子及孢子梗無色透明，孢子梗頂端變尖，基部無隔膜；所述薏苡內生真菌在PDA培養基上25℃培養，3周后，得到細小的白色菌落，菌落直徑10-20mm，菌落正面白色，棉質，質地緊密，邊緣平整，中央隆起或稍有皺褶，背面黃色至深褐色，從中央到周圍顏色逐漸變淺。

所述薏苡內生真菌的tef1基因序列如SEQIDNO.1所示，所述薏苡內生真菌的tub2基因序列如SEQIDNO.2所示。

本發明所述的薏苡內生真菌的共培養特征為：

(1)所述薏苡內生真菌與薏苡共培養的特征：內生真菌固體菌種培養基：麥麩250g，棉籽殼250g，葡萄糖20g，KH₂PO₄3g，MgSO_4·7H₂O1.5g，1L去離子水；內生真菌與薏苡共培養盆栽土基質：腐殖土：蛙石＝3：l；每日光照培養16h，光照度2000Ix，溫度25±1℃；薏苡內生真菌與薏苡組培苗共培養120d后收獲植株，測定薏苡組培苗的各項生長指標，包括株高、鮮重和干重，結果表明，在同樣生長條件及采收后處理條件下，和對照組相比，薏苡內生真菌處理組的薏苡組培苗的各項生長指標均具有顯著性差異，處理組的株高是對照組的108.89％，全株的鮮重和干重分別達到對照組的118.71％和166.55％；

(2)所述薏苡內生真菌與擬南芥共培養特征：培養基1/2MS，光照培養9-15d，每日光照16h，光照度2000Ix，溫度25±1℃；培養第9d擬南芥有大量須根出現；培養第10d，須根迅速增多且葉片變大，薏苡內生真菌處理組的側根數是對照組的10.30倍；培養第15d，須根伸長、加粗，葉片肥大變綠，開花；此時薏苡內生真菌處理組的主根長是對照組的83.14％，處理組的葉片數、苗高、鮮重和開花率分別是對照組的1.14、4.29、1.55和5.25倍。

本發明所述的薏苡內生真菌分離純化方法如下：

(1)沖洗采集到的新鮮薏苡葉、莖、種仁，除去表面的泥土和灰塵后，用去離子水洗3次；

(2)按以下程序進行表面消毒：75％乙醇浸泡30s；1％次氯酸鈉浸泡5min；75％乙醇浸泡30s；無菌去離子水洗3次；