[發明專利]一種薏苡內生真菌及其應用

在審

• 申請號: 201610092344.9
• 申請日: 2016-02-19
• 公開（公告）號: CN105624047A
• 公開（公告）日: 2016-06-01
• 發明（設計）人: 秦路平;賈敏;楊陽;韓婷;辛海量;張巧艷;李義敏;孔周揚
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第二軍醫大學
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;A01N63/04;A01P21/00;C12R1/645
• 代理公司: 上海卓陽知識產權代理事務所(普通合伙) 31262
• 代理人: 周春洪

1.一種薏苡內生真菌，其特征在于，它的命名為香柱菌屬E.bromicola，保 藏登記號為CGMCCNo.11410。

2.根據權利要求1所述的薏苡內生真菌，其特征在于，所述薏苡內生真菌顯 微形態為：在顯微鏡下可觀察到大量成熟的分生孢子，分生孢子橢圓形或腎形， 單個頂生，分生孢子及孢子梗無色透明，孢子梗頂端變尖，基部無隔膜；所述 薏苡內生真菌在PDA培養基上25℃培養，3周后，得到細小的白色菌落，菌落 直徑10-20mm，菌落正面白色，棉質，質地緊密，邊緣平整，中央隆起或稍有 皺褶，背面黃色至深褐色，從中央到周圍顏色逐漸變淺。

3.根據權利要求1所述的薏苡內生真菌，其特征在于，所述薏苡內生真菌的 tef1基因序列如SEQIDNO.1所示，所述薏苡內生真菌的tub2基因序列如SEQID NO.2所示。

4.根據權利要求1所述的薏苡內生真菌，其特征在于，

(1)所述薏苡內生真菌與薏苡共培養的特征：內生真菌固體菌種培養基： 麥麩250g，棉籽殼250g，葡萄糖20g，KH₂PO₄3g，MgSO₄·7H₂O1.5g，1L 去離子水；內生真菌與薏苡共培養盆栽土基質：腐殖土：蛙石＝3：l；每日光照 培養16h，光照度2000Ix，溫度25±1℃；薏苡內生真菌與薏苡組培苗共培養120 d后收獲植株，測定薏苡組培苗的各項生長指標，包括株高、鮮重和干重，結果 表明，在同樣生長條件及采收后處理條件下，和對照組相比，薏苡內生真菌處 理組的薏苡組培苗的各項生長指標均具有顯著性差異，處理組的株高是對照組 的108.89％，全株的鮮重和干重分別達到對照組的118.71％和166.55％；

(2)所述薏苡內生真菌與擬南芥共培養特征：培養基1/2MS，光照培養 9-15d，每日光照16h，光照度2000Ix，溫度25±1℃；培養第9d擬南芥有大 量須根出現；培養第10d，須根迅速增多且葉片變大，薏苡內生真菌處理組的 側根數是對照組的10.30倍；培養第15d，須根伸長、加粗，葉片肥大變綠，開 花；此時薏苡內生真菌處理組的主根長是對照組的83.14％，處理組的葉片數、 苗高、鮮重和開花率分別是對照組的1.14、4.29、1.55和5.25倍。

5.根據權利要求1所述的薏苡內生真菌，其特征在于：所述薏苡內生真菌分 離純化方法如下：

(1)沖洗采集到的新鮮薏苡葉、莖、種仁，除去表面的泥土和灰塵后，用去 離子水洗3次；

(2)按以下程序進行表面消毒：75％乙醇浸泡30s；1％次氯酸鈉浸泡5min； 75％乙醇浸泡30s；無菌去離子水洗3次；

(3)吸干殘留水分，將葉、莖切成0.5cm×0.5cm的組織塊，種仁切成0.1cm ×0.1cm的組織塊，

(4)分別從3個部位中各隨機挑取8個組織塊，每4個組織塊為一組放在加 有青霉素(50mg/L)的PDA培養基的培養皿中。培養皿用封口膜(Pechiney, Chicago,IL)密封后，于26±2℃培養7-14d，待菌落從組織塊周圍長出后，挑取 菌絲尖端轉移到新的PDA培養基上純化培養，并按形態合并，既得。

6.一種菌劑，它的活性成分為權利要求1-4任一所述的薏苡內生真菌。

7.權利要求1-4任一所述薏苡內生真菌在促進擬南芥或薏苡生長中的應用。