[發明專利]磷酯酰肌醇蛋白聚糖3檢測試劑盒

在審

• 申請號: 201610092184.8
• 申請日: 2016-01-29
• 公開（公告）號: CN105759039A
• 公開（公告）日: 2016-07-13
• 發明（設計）人: 錢承玉;錢琛;呂作文;劉壯;馬瑞靈
• 申請（專利權）人: 山東康力醫療器械科技有限公司
• 主分類號: G01N33/574
• 分類號: G01N33/574
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域：

本發明屬于醫學免疫學領域，涉及一種免疫檢測試劑，進一步地，本發明涉及一種磷酯酰肌醇蛋白聚糖3檢測試劑盒。

背景技術：

原發性肝癌(primaryhepaticcarcinoma，PHC)是目前世界上死亡率最高的惡性腫瘤之一，確診后的五年生存率不足12％，近年來其發病率在世界范圍內有增高趨勢。外科切除仍是目前PHC最常用的治療方法，但大多數患者就診時已屬中晚期，失去了最佳手術治療時機，因而提高PHC的早期診斷水平是提高肝癌治療和預后效果的關鍵。甲胎蛋白(AFP)是目前全世界應用最廣泛的肝癌腫瘤標記物，但PHC患者AFP敏感性僅為35％-65％，特異性不到80％，尤其是早期肝癌陽性率更低，以此作為PHC早期確診的方法并不十分理想，迫切需要尋找新的標記物。磷酯酰肌醇蛋白聚糖3(Glypican-3，GPC3)是近來發現的具有潛在價值的肝癌血清標記物。GPC3屬于膜性硫酸乙酰肝素類糖蛋白超家族成員，具有羥基末端連接在細胞膜上，氨基端游離在細胞外的特殊結構，被認為與定位，輸送有關。它是由蛋白質、脂類和糖三者共價連接的復雜糖復合物，其氨基端(N)為可溶性蛋白，在肝癌細胞中表達時可分泌至外周血液中，這是外周循環血液中能夠檢測到GPC3的分子生物學基礎。臨床基礎研究顯示，肝細胞發生癌變時GPC3可異常表達，激活的GPC3可通過多種信號傳導通路促進肝細胞惡性轉化，增強其侵襲轉移能力。單一GPC3或AFP在PHC表達有限，而聯合GPC3和AFP檢測顯著提高PHC診斷的敏感性和特異性，分別達84.2％和95.7％，顯著高于AFP或GPC3單獨檢測。能改善PHC診斷水平。尤其是利用GPC3檢測可以提高AFP陰性PHC的診斷水平，對PHC早期診斷和篩查具有一定意義，是提高PHC早期診斷和鑒別診斷水平的有意義的指標。。

目前常用的測定磷酯酰肌醇蛋白聚糖3蛋白的方法主要是酶聯免疫吸附法(ELISA)。ELISA法操作時間長，無法準確進行定量測定，更多的是用來定性。膠乳增強免疫比濁法是一種可以準確定量測定的方法，它的基本原理是：將抗體包被在膠乳顆粒上，在與相應抗原發生免疫反應后，能夠形成聚集顆粒，在一定波長條件下，聚集顆粒形成的濁度與相應抗原有比例關系，因此通過測定聚集物所產生的濁度，即可測出樣本中待檢抗原的含量。

發明內容：

本發明所要解決的技術問題是針對上述背景技術的不足，提供一種靈敏度高，準確性好，線性范圍寬，并且生產成本低的磷酯酰肌醇蛋白聚糖3檢測試劑盒。

為達到上述目的，本發明采用的技術方案為：一種磷酯酰肌醇蛋白聚糖3檢測試劑盒，該試劑盒包括試劑R1、試劑R2，試劑R1包括緩沖液、穩定劑、電解質、表面活性劑和防腐劑；試劑R2包括用抗磷酯酰肌醇蛋白聚糖3抗體致敏的聚苯乙烯膠乳顆粒、緩沖液、穩定劑、表面活性劑和防腐劑。

本發明上述試劑盒中試劑R1與試劑R2的體積比為4∶1。

本發明試劑R1和試劑R2中的緩沖液包括但不限于PBS緩沖液、Tris緩沖液、甘氨酸緩沖液、硼酸鹽緩沖液、醋酸鹽緩沖液、檸檬酸-磷酸鹽緩沖液、2-嗎啉乙磺酸緩沖液、氯化銨緩沖液以及其他具有相似性質的緩沖液中的一種或者幾種。試劑R1所用的緩沖液與試劑R2所用的緩沖液只要為上面的緩沖液中的一種任意搭配均可。

本發明試劑R1和試劑R2中的防腐劑包括但不限于苯甲酸鈉、亞硝酸鈉、Proclin300、山梨酸鉀、疊氮鈉以及其他具有類似性質的防腐劑中的一種或幾種。

本發明試劑R1和試劑R2中的穩定劑包括但不限于聚乙二醇、丙二醇、蔗糖、丙三醇、山梨醇、BSA、海藻糖以及其他具有類似性質的穩定劑中的一種或者幾種。

本發明試劑R1中的電解質包括但不限于氯化鈉、氯化鉀、氯化鈣以及其他具有類似性質的電解質中的一種或者幾種。

本發明試劑R1中的表面活性劑包括但不限于SPAN系列表面活性劑、TRITON系列表面活性劑、TWEEN系列表面活性劑以及其他具有類似性質的表面活性劑中的一種或者幾種。