[發明專利]一種結合瓶外生根技術的羽扇豆“畫廊”葉片快繁方法

有效

• 申請號: 201610090868.4
• 申請日: 2016-02-19
• 公開（公告）號: CN105660407B
• 公開（公告）日: 2017-08-08
• 發明（設計）人: 王小玲;劉騰云;高柱;余發新;幸學俊;楊愛紅;劉淑娟;肖亮
• 申請（專利權）人: 江西省科學院生物資源研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 南昌市平凡知識產權代理事務所36122
• 代理人: 姚伯川

技術領域

本發明涉及一種羽扇豆“畫廊”葉片快速誘導再生植株的方法，屬花卉組織培養技術領域。

背景技術

羽扇豆(Lupins polyphyllus Lindl)屬豆科蝶形花亞科羽扇豆屬一年至多年生草本植物，俗稱魯冰花，因其賦予特殊的寓意—中國的母親花，而得到人們的加倍鐘愛?！爱嬂取笔鞘袌錾吓嘤脑缁ㄓ鹕榷蛊贩N，有粉紅色、紅色、白色、黃色、藍色及混色等花色系列，株形緊湊、葉片茂盛，株高40～50cm，也是非常優秀的矮生盆栽品種，它的出現使羽扇豆有機會從園林應用中走進普通家庭。

羽扇豆“畫廊”以種子繁殖為主，但因羽扇豆為自花授粉植物，種子繁殖系數低，種子以進口為主，相應成本占生產成本的30％，且時間和數量上很難保證，優質種苗生產成為制約羽扇豆“畫廊”在我國推廣的瓶頸。目前，以進口種子為外植體進行羽扇豆“畫廊”組織培養快繁的技術仍不夠成熟，種苗難以供應；另外，在栽培生產過程中通過自然篩選或育種選育的優良羽扇豆“畫廊”單株，因其結實率非常低，其優良性狀很難遺傳給后代，良種推廣嚴重受阻。因此，結合瓶外生根技術進行羽扇豆“畫廊”葉片離體快繁，不僅可以解決種苗供需矛盾，降低生產成本，也可以對篩選的優良單株進行無性繁殖，保存其優良性狀，對羽扇豆良種選育和培育工作具有重要意義。

發明內容

本發明所要解決的問題是羽扇豆“畫廊”種苗供需矛盾和優良單株無性繁殖問題，為生產提供一種可周年生產的低成本羽扇豆“畫廊”優質種苗快速繁殖及優良單株遺傳性狀高效保存的方法。

本發明的技術方案是，一種結合瓶外生根技術的羽扇豆“畫廊”葉片快繁方法，包括葉片處理、愈傷組織誘導、分化培養、增殖培養與再分化、瓶外生根培養及移栽定植步驟，其特征在于，所述方法步驟為：

(1)剪下離葉尖2/3的幼嫩葉片，用流水沖洗30min，通過主脈橫切成1cm寬的片狀；在超凈工作臺上，先用75％酒精消毒10s，無菌水漂洗2次；再用10％的NaOCl磁力攪拌5min，無菌水漂洗5次；然后用0.1％的升汞溶液消毒3min，無菌水漂洗5次；最后用無菌濾紙吸干葉片表面水分；切斷葉緣，以橫切主脈的形式切成3mm×3mm塊狀，并在主脈上橫切2～3個切口；

(2)將處理好的葉片背面朝下接種到愈傷組織誘導培養基MS+6-BA 0.5mg/L+ZT 1.0mg/L+PVP 5.0mg/L+VC 1.0mg/L上；接種后先在22℃的恒溫恒濕培養箱中進行暗培養15d；再進行光照培養，15～20d產生黃綠色疏松透明的愈傷組織；

其中，MS是培養基(Murashige&Skoog Medium)，6-BA是6-芐氨基嘌呤，ZT是玉米素，PVP是聚乙烯吡咯烷酮，VC是抗壞血酸；

(3)當愈傷組織長到1mm或稍大些時，及時轉移到分化培養基MS+6-BA 0.8mg/L+ZT 0.6mg/L+IAA0.2mg/L+水解酪蛋白(CH)300mg/L+PVP 5.0mg/L+VC 1.0mg/L上；繼續光照培養，20～25d形成淺綠色質地致密的愈傷組織，并在愈傷組織上分化出綠色芽點；

其中，MS是培養基(Murashige&Skoog Medium)，6-BA是6-芐氨基嘌呤，ZT是玉米素，IAA是3-吲哚乙酸，PVP是聚乙烯吡咯烷酮，VC是抗壞血酸；

(4)切下愈傷組織上生長的綠色芽點，接種到增殖與再分化誘導培養基MS+6-BA 1.5mg/L+NAA 0.25mg/L+AC 2.0g/L+GA₃ 1.0mg/L上；繼續光照培養，25～30d可分化出健康叢生芽；

其中，MS是培養基(Murashige&Skoog Medium)，6-BA是6-芐氨基嘌呤，NAA是α-萘乙酸，AC是活性炭，GA₃是赤霉素；

(5)將產生的2～3cm健康單個芽切下，先在生根液中浸泡3min，再扦插至裝有營養基質的育苗袋后置于溫室大棚；扦插后的15d內大棚相對空氣濕度保持在85％以上，溫度控制在15℃～25℃；扦插20d后，每10d用1/2MS大量元素母液作為肥料進行噴灑一次，連續噴灑3次；育苗袋為無底蜂窩育苗袋，規格是8cm×13cm×350孔；營養基質的體積比是腐葉土:紅壤土:骨粉＝6:2:2；營養基質事先充分暴曬后，用1000倍甲基托布津消毒，薄膜覆蓋，7d后扦插；20d可見明顯生根，30～35d可見新芽生出，50d后即可移栽定植；