[發明專利]一種結合瓶外生根技術的羽扇豆“畫廊”葉片快繁方法

有效

• 申請號: 201610090868.4
• 申請日: 2016-02-19
• 公開（公告）號: CN105660407B
• 公開（公告）日: 2017-08-08
• 發明（設計）人: 王小玲;劉騰云;高柱;余發新;幸學俊;楊愛紅;劉淑娟;肖亮
• 申請（專利權）人: 江西省科學院生物資源研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 南昌市平凡知識產權代理事務所36122
• 代理人: 姚伯川

1.一種結合瓶外生根技術的羽扇豆“畫廊”葉片快繁方法，包括葉片處理、愈傷組織誘導、分化培養、增殖培養與再分化、瓶外生根培養及移栽定植步驟，其特征在于，所述方法步驟為：

(1)剪下離葉尖2/3的幼嫩葉片，用流水沖洗30min，通過主脈橫切成1cm寬的片狀；在超凈工作臺上，先用75％酒精消毒10s，無菌水漂洗2次；再用10％的NaOCl磁力攪拌5min，無菌水漂洗5次；然后用0.1％的升汞溶液消毒3min，無菌水漂洗5次；最后用無菌濾紙吸干葉片表面水分；切斷葉緣，以橫切主脈的形式切成3mm×3mm塊狀，并在主脈上橫切2～3個切口；

(2)將處理好的葉片背面朝下接種到愈傷組織誘導培養基MS+6-BA 0.5mg/L+ZT 1.0mg/L+PVP 5.0mg/L+VC 1.0mg/L上；接種后先在22℃的恒溫恒濕培養箱中進行暗培養15d；再進行光照培養，15～20d產生黃綠色疏松透明的愈傷組織；

其中，MS是培養基，6-BA是6-芐氨基嘌呤，ZT是玉米素，PVP是聚乙烯吡咯烷酮，VC是抗壞血酸；

(3)當愈傷組織長到1mm或稍大些時，及時轉移到分化培養基MS+6-BA 0.8mg/L+ZT 0.6mg/L+IAA 0.2mg/L+水解酪蛋白(CH)300mg/L+PVP 5.0mg/L+VC 1.0mg/L上；繼續光照培養，20～25d形成淺綠色質地致密的愈傷組織，并在愈傷組織上分化出綠色芽點；

其中，MS是培養基，6-BA是6-芐氨基嘌呤，ZT是玉米素，IAA是3-吲哚乙酸，PVP是聚乙烯吡咯烷酮，VC是抗壞血酸；

(4)切下愈傷組織上生長的綠色芽點，接種到增殖與再分化誘導培養基MS+6-BA 1.5mg/L+NAA 0.25mg/L+AC 2.0g/L+GA₃ 1.0mg/L上；繼續光照培養，25～30d可分化出健康叢生芽；

其中，MS是培養基，6-BA是6-芐氨基嘌呤，NAA是α-萘乙酸，AC是活性炭，GA₃是赤霉素；

(5)將產生的2～3cm健康單個芽切下，先在生根液中浸泡3min，再扦插至裝有營養基質的育苗袋后置于溫室大棚；扦插后的15d內大棚相對空氣濕度保持在85％以上，溫度控制在15℃～25℃；扦插20d后，每10d用1/2MS大量元素母液作為肥料進行噴灑一次，連續噴灑3次；育苗袋為無底蜂窩育苗袋，規格是8cm×13cm×350孔；營養基質的體積比是腐葉土:紅壤土:骨粉＝6:2:2；營養基質事先充分暴曬后，用1000倍甲基托布津消毒，薄膜覆蓋，7d后扦插；20d可見明顯生根，30～35d可見新芽生出，50d后即可移栽定植；所述生根液為NAA 300mg/L+VB₁ 0.15g/L，其中，NAA為α-萘乙酸，VB₁是維生素B₁；

(6)將步驟(5)生長良好的幼苗進行定植，營養缽規格為25cm×20cm，營養土按體積比為表層田土:泥炭土＝5:2比例混合均勻；栽種選擇下午進行，及時澆灌封口水，連續3天注意保持土壤濕潤。

2.根據權利要求1所述一種結合瓶外生根技術的羽扇豆“畫廊”葉片快繁方法，所述步驟(2)、步驟(3)和步驟(4)的培養基中白砂糖45g/L，瓊脂6g/L，pH值為5.8～5.9。

3.根據權利要求1所述一種結合瓶外生根技術的羽扇豆“畫廊”葉片快繁方法，所述步驟(2)和步驟(3)，光照培養的光照強度2000～2500Lux，每天光照12h，培養溫度為(22±2)℃。

4.根據權利要求1所述一種結合瓶外生根技術的羽扇豆“畫廊”葉片快繁方法，所述步驟(4)，光照培養的光照強度3000～3500Lux，每天光照14h，培養溫度為(22±2)℃。