[發(fā)明專利]一種用于篩選具有促血管新生活性的藥物的細(xì)胞模型及其用途和使用方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610090360.4
• 申請日: 2016-02-17
• 公開（公告）號: CN105586359A
• 公開（公告）日: 2016-05-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 譚銳;顧健
• 申請（專利權(quán)）人: 西南交通大學(xué)
• 主分類號: C12N15/85
• 分類號: C12N15/85;C12N15/12;C12N15/53;C12N5/10;C12N15/66;G01N33/68;C12Q1/66
• 代理公司: 成都華風(fēng)專利事務(wù)所(普通合伙) 51223
• 代理人: 杜朗宇

1.一種基因構(gòu)建物，其特征在于：所述基因構(gòu)建物從5’端到3’端依次含有：VEGF啟動(dòng)子 基因-1106bp～+113bp序列和報(bào)告基因序列。

2.如權(quán)利要求1所述的基因構(gòu)建物，其特征在于：所述報(bào)告基因選自：熒光蛋白基因和/ 或熒光素酶基因；進(jìn)一步地，所述熒光蛋白基因?yàn)榫G色熒光蛋白基因或紅色熒光蛋白基因， 所述熒光素酶基因?yàn)槲灮鹣x熒光素酶基因。

3.一種重組載體，其特征在于：所述的重組載體含有權(quán)利要求1或2任一項(xiàng)所述的基因 構(gòu)建物。

4.一種穩(wěn)定的細(xì)胞，其特征在于：所述的細(xì)胞含有權(quán)利要求3所述的重組載體或其基因 組中整合有權(quán)利要求1或2任一項(xiàng)所述的基因構(gòu)建物。

5.如權(quán)利要求4所述的穩(wěn)定的細(xì)胞，其特征在于：所述的細(xì)胞選自HEK293細(xì)胞、Hela細(xì) 胞、CHO細(xì)胞或干細(xì)胞中的任一種。

6.構(gòu)建權(quán)利要求3所述重組載體的方法，其特征在于：它包括如下步驟：

（1）合成VEGF啟動(dòng)子基因-1106bp～+113bp序列；

（2）將步驟（1）合成的序列與帶有報(bào)告基因的報(bào)告載體分別進(jìn)行酶切，連接報(bào)告載體與 啟動(dòng)子片段，轉(zhuǎn)化大腸桿菌，抗性篩選，挑選陽性轉(zhuǎn)化子，提取質(zhì)粒，即得重組載體；

進(jìn)一步地，步驟（2）中，所述報(bào)告載體為帶有報(bào)告基因的pSC基礎(chǔ)質(zhì)粒。

7.構(gòu)建權(quán)利要求4所述的穩(wěn)定的細(xì)胞的方法，其特征在于：將權(quán)利要求3所述的重組載 體轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞、Hela細(xì)胞、CHO細(xì)胞或干細(xì)胞中的任一種。

8.權(quán)利要求4所述的穩(wěn)定的細(xì)胞的用途，其特征在于：所述的細(xì)胞用于篩選可提高VEGF 表達(dá)水平或具有促血管新生活性的藥物。

9.一種篩選可調(diào)節(jié)VEGF表達(dá)水平或具有促血管新生活性的藥物的方法，其特征在于， 所述方法包括如下步驟：

（1）將候選藥物給予權(quán)利要求4或5所述的穩(wěn)定的細(xì)胞；

（2）檢測所述細(xì)胞中報(bào)告基因的表達(dá)情況；

（3）判斷結(jié)果，若所述候選藥物能提高報(bào)告基因的表達(dá)，則表明該候選藥物可提高VEGF 表達(dá)水平或具有促血管新生活性；

進(jìn)一步地，步驟（1）包括將候選藥物加入權(quán)利要求4或5所述的穩(wěn)定的細(xì)胞培養(yǎng)體系中 共培養(yǎng)；

步驟（2）包括檢測實(shí)驗(yàn)組的報(bào)告基因的表達(dá)，并與空白對照組比較，所述空白對照組是 不添加所述候選藥物的與實(shí)驗(yàn)組相同條件培養(yǎng)的權(quán)利要求4或5所述的細(xì)胞；

若實(shí)驗(yàn)組中報(bào)告基因的表達(dá)水平高于對照組，表明候選藥物可提高VEGF表達(dá)水平或具 有促血管新生的活性。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于：

實(shí)驗(yàn)組的報(bào)告基因的表達(dá)水平/對照組的報(bào)告基因的表達(dá)水平≥150%，表明候選藥物 可能具有提高VEGF表達(dá)水平或可能具有促血管新生活性。