[發明專利]小片段DNA共轉化替換大片段DNA的方法有效
| 申請號： | 201610088967.9 | 申請日： | 2016-02-17 |
| 公開（公告）號： | CN105624143B | 公開（公告）日： | 2018-10-09 |
| 發明（設計）人： | 元英進;謝澤雄;吳毅;李炳志;王霞 | 申請（專利權）人： | 天津大學 |
| 主分類號： | C12N15/09 | 分類號： | C12N15/09;C12N15/90;C12N1/19;C12R1/865 |
| 代理公司： | 北京集佳知識產權代理有限公司 11227 | 代理人： | 趙青朵 |
| 地址： | 300072 天津市*** | 國省代碼： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 片段 dna 轉化 替換 方法 | ||
1.小片段DNA共轉化替換大片段DNA的方法，其特征在于，多個小片段DNA共轉化入釀酒酵母細胞中，利用釀酒酵母的同源重組特性，實現大片段DNA的替換；
所述大片段DNA為酵母V號染色體。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述小片段DNA為不大于4kb的DNA；所述大片段DNA為不大于30kb的DNA。
3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，相鄰兩個所述小片段DNA之間存在不大于750bp的重疊區域。
4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，采用兩個篩選標記尿嘧啶(URA3)和卡那霉素抗性(KanMX)的組合或尿嘧啶(URA3)和亮氨酸(LEU2)的組合對所述大片段DNA的替換進行表型表征。
5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述小片段DNA選自如SEQ IDNo.1～SEQID No.17所示或如SEQ ID No.86～SEQ ID No.103所示的核苷酸序列。
6.根據權利要求1至5任一項所述的制備方法制得釀酒酵母菌株。
7.一種組合物，其特征在于，包括小片段DNA；所述小片段DNA為不大于4kb的DNA；相鄰兩個所述小片段DNA之間存在不大于750bp的重疊區域；
多個所述小片段DNA能夠共轉化入釀酒酵母細胞中，利用釀酒酵母的同源重組特性，實現大片段DNA的替換；
所述大片段DNA為酵母V號染色體。
8.根據權利要求7所述的組合物，其特征在于，所述組合物中所述小片段DNA選自如SEQID No.1～SEQ ID No.17所示的核苷酸序列。
9.根據權利要求8所述的組合物，其特征在于，還包括釀酒酵母細胞和/或篩選標記；所述篩選標記為尿嘧啶(URA3)和卡那霉素抗性(KanMX)的組合或尿嘧啶(URA3)和亮氨酸(LEU2)的組合。
10.一種試劑盒，其特征在于，包括權利要求7至9任一項所述的組合物。
11.根據權利要求7至9任一項所述的組合物或如權利要求10所述的試劑盒在大片段DNA的替換中的應用。
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