[發明專利]一種喹諾酮納米分子印跡聚合物制備方法與應用

在審

• 申請號: 201610088952.2
• 申請日: 2016-02-17
• 公開（公告）號: CN105713156A
• 公開（公告）日: 2016-06-29
• 發明（設計）人: 唐斯萍;楊穎群;許志鋒;馮泳蘭
• 申請（專利權）人: 衡陽師范學院
• 主分類號: C08F292/00
• 分類號: C08F292/00;C08F220/06;C08F222/14;G01N21/31;G01N33/535;G01N33/543;C08J9/26
• 代理公司: 四川君士達律師事務所 51216
• 代理人: 芶忠義

技術領域

本發明屬于微量物質檢測技術領域，尤其涉及一種喹諾酮納米分子印跡聚合物及其制備方法與應用。

背景技術

抗生素是一種由微生物自身產生或人工合成、低濃度下能抑制微生物生產或殺滅其他微生物的有機化學物質，除了用于人類和動物細菌性感染疾病的治療，抗生素也被作為促長劑和飼料添加劑在集約化畜牧業和養殖業中大量應用，隨著大量抗生素的使用，越來越多不能被充分吸收利用的抗生素通過人畜糞便直接排出，這些含抗生素的糞便可通過有機肥料的施用進入農田與植物之間發生遷移，此外這些抗生素有可能通過滲透、徑流、淋溶等方式遷移到地表水和地下水中，重新流入環境。

目前監測抗生素殘留檢測方法主要有微生物法、免疫法、氣相色譜法、高效液相色譜法和液相色譜-串聯質譜法。微生物法簡單快速，但檢測限高，特異性差；色譜檢測法耗時長、在殘留分離檢測中，樣品前處理過程復雜，并影響分析的準確度；免疫檢測法簡單、快速，檢出限低，可進行大規模篩選，但是其相應抗體的制備需要大量實驗動物，而且抗體在惡劣環境下易于失活，影響檢測結果。

此外，還有利用分子印跡固相萃取-高效液相色譜法分析雞肉中的弗洛喹酮類抗生素如用磁性熒光分子印跡硅納米球檢測人尿液中的環丙沙星或諾氟沙星；磁性分子印跡聚合物固相萃取牛奶中的三種氟喹諾酮類抗生素，并用HPLC進行檢測。但目前報道的分子印跡方法都是采用沉淀聚合法合成分子印跡聚合物，反應時間過長，而且合成的聚合物成塊狀，需要經過長時間的打磨、篩分才能用于固相萃取，分子印跡聚合物利用率不高，此外還需聯用HPLC或HPLC-MS等技術，所需儀器貴重。

發明內容

本發明的目的在于提供一種喹諾酮納米分子印跡聚合物及其制備方法與應用，旨在解決現有喹諾酮抗生素檢測技術易于失活、檢測結果不佳等問題。

本發明是這樣實現的，一種喹諾酮納米分子印跡聚合物的制備方法，該方法包括以下步驟：

（1）固相載體玻璃珠上引入抗生素

將250~300g玻璃珠加入到120~160mL、1~4mol/L的NaOH水溶液中，加熱沸騰10~15分鐘，取出玻璃珠用水洗至洗液的pH=8~9，烘干得到羥基化玻璃珠；

將羥基化玻璃珠加入到150mL干甲苯中，再加入3.3mLN-[3-(三甲氧基硅基)丙基]乙二胺，劇烈搖動后，室溫下放置過夜，過濾、丙酮沖洗，得到硅烷化玻璃珠；

在20mL乙腈和80mLpH6.0PBS緩沖溶液中，加入80~120mg喹諾酮類抗生素、80~100mg1-乙基-3-（3-二甲基氨基丙基）-碳二亞胺鹽酸鹽和120~150mgN-羥基琥珀酰亞胺，室溫放置10~15分鐘后倒入100g上述硅烷化玻璃珠中，加1mol/L的NaOH水溶液調節反應液pH至7.4，室溫下反應2~3h，抽濾，水洗，干燥，得到喹諾酮抗生素衍生玻璃珠；

（2）合成喹諾酮類抗生素印跡的納米印跡聚合物

將8.0~10.0mmol甲基丙烯酸、4.0~5.0mmol乙二醇二甲基丙烯酸酯、3.0~3.5mmol三羥甲基丙烷三甲基丙烯酸酯、1.0mmol二乙基二硫代氨基羧酸芐酯和0.1~0.15mmol四（3-巰基丙酸）季戊四醇酯溶于10g的乙腈中，得到混合溶液，并所述混合溶液中通氮氣20分鐘；

取25~30g所述喹諾酮類抗生素衍生玻璃珠于平底杯中，往燒杯中通氮氣20分鐘；

將所述混合溶液倒入上述平底杯中，紫外照射1~3分鐘，得到反應混合物；

將所述反應混合物轉移至固相萃取管中，用6~8床的冷乙腈洗滌玻璃珠，得到半成品玻璃珠，通氮氣10分鐘；

取220~270mgPEG4000溶于8mL乙腈中，通氮氣5分鐘后，倒入上述半成品玻璃珠表面，搖動混勻，紫外照射1~3分鐘，將所述反應混合物倒入至固相萃取管中，用6~8床的冷乙腈洗滌玻璃珠，然后用80~100mL、60~70℃乙腈淋洗，得到喹諾酮類抗生素印跡的納米分子印跡聚合物溶液，自然冷卻至室溫，用微孔超離心過濾器（30kDaMWCO）離心分離得到喹諾酮類抗生素納米分子印跡聚合物溶液。

本發明進一步提供了上述喹諾酮納米分子印跡聚合物在檢測喹諾酮抗生素方面的應用。

優選地，所述喹諾酮抗生素的檢測包括以下步驟：

（1）酶標物辣根過氧化物酶-模板分子HRP-T的合成