[發明專利]釀酒酵母基因組定點突變的方法在審
| 申請號： | 201610088284.3 | 申請日： | 2016-02-17 |
| 公開（公告）號： | CN105624187A | 公開（公告）日： | 2016-06-01 |
| 發明（設計）人： | 元英進;謝澤雄;李炳志 | 申請（專利權）人： | 天津大學 |
| 主分類號： | C12N15/81 | 分類號： | C12N15/81;C12N1/19;C12R1/865 |
| 代理公司： | 北京集佳知識產權代理有限公司 11227 | 代理人： | 趙青朵 |
| 地址： | 300072 天津市*** | 國省代碼： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 釀酒 酵母 基因組 定點 突變 方法 | ||
1.一種釀酒酵母基因組定點突變的方法，其特征在于，包括如下步驟：
步驟1：選擇突變位點的靶位點；
步驟2：酵母轉化，引入釀酒酵母基因組點突變；
步驟3：對點突變進行驗證。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟1選擇突變位點位于PAM序列(NGG)中 或者PAM序列前11bp內的作為靶位點。
3.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于，步驟2中所述酵母轉化為向釀酒酵母細 胞中轉化Cas9質粒、guideRNA質粒和攜帶突變點的DNA片段。
4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述guideRNA引導Cas9蛋白在待修復位 點附近發揮作用，將釀酒酵母基因組進行切割處雙鏈切口，實現供體DNA的高效重組。
5.根據權利要求1至4任一項所述的方法，其特征在于，步驟1所述點突變選自釀酒酵母 V號染色體上位點9、位點14或位點16。
6.根據權利要求1至5任一項所述的方法，其特征在于，步驟3所述驗證通過PCR和/或 SangerDNA測序驗證。
7.根據權利要求1至6任一項所述的方法，其特征在于，步驟1所述點突變至少為1個。
8.根據權利要求1至7任一項所述的方法，其特征在于，步驟1所述點突變為釀酒酵母V 號染色體上位點14的A突變為C。
9.根據權利要求1至8任一項所述的方法，其特征在于，步驟1所述點突變為釀酒酵母V 號染色體上位點16的A突變為C。
10.根據權利要求1至9任一項所述的方法，其特征在于，步驟1所述點突變為釀酒酵母V 號染色體上位點16的C突變為G。
11.根據權利要求1至10任一項所述的方法構建的釀酒酵母突變菌株。
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