[發明專利]一種致敏NK細胞的方法及組合物

有效

• 申請號: 201610088091.8
• 申請日: 2016-02-16
• 公開（公告）號: CN105505872B
• 公開（公告）日: 2019-01-15
• 發明（設計）人: 葛嘯虎;陳海佳;王一飛;萬樺;張維敏
• 申請（專利權）人: 廣州賽萊拉干細胞科技股份有限公司
• 主分類號: C12N5/0783
• 分類號: C12N5/0783;C12N1/38
• 代理公司: 北京市盈科律師事務所 11344
• 代理人: 劉雪花

本發明公開了一種致敏NK細胞的方法及組合物。所述致敏NK細胞的組合物包含實體瘤細胞抗原、CD28單抗、CD137單抗和桔紅素。所述致敏NK細胞的方法，包括以下步驟：向NK細胞懸液中加入CD28單抗和實體瘤細胞抗原，在5％CO₂、37℃中培養24小時，再加入CD137單抗和桔紅素，繼續在5％CO₂、37℃中培養24小時。通過本發明致敏的NK細胞，對于腫瘤細胞的殺傷活性強，對抗原性較弱的腫瘤同樣具有較強的殺傷能力。本發明致敏NK細胞分為兩步進行刺激，先加入CD28單抗和實體瘤細胞抗原，以刺激NK細胞的識別功能，后加入CD137單抗和桔紅素，再刺激免疫細胞向NK細胞分化。

技術領域

本發明涉及細胞培養領域，尤其涉及一種致敏NK細胞的方法及組合物。

背景技術

NK細胞又叫自然殺傷細胞(natural killer cell，NK)，是機體重要的免疫細胞，不僅與抗腫瘤、抗病毒感染和免疫調節有關，而且在某些情況下參與超敏反應和自身免疫性疾病的發生。NK細胞主要分布于外周血中，占PBMC的5～10％。NK細胞的殺傷活性無MHC限制，不依賴抗體，因此稱為自然殺傷活性。NK細胞作用于靶細胞后殺傷作用出現早，在體外1小時、體內4小時即可見到殺傷效應。NK細胞的靶細胞主要有某些腫瘤細胞(包括部分細胞系)、病毒感染細胞、某些自身組織細胞(如血細胞)、寄生蟲等，因此NK細胞是機體抗腫瘤、抗感染的重要免疫因素。

NK細胞在免疫細胞治療中發揮了重要作用，但是在某些腫瘤疾病當中，由于腫瘤細胞免疫原性較弱、且能分泌免疫抑制因子促使細胞凋亡或者降低殺傷活性，導致NK細胞殺傷活性較差。現有技術通過加入該類腫瘤細胞抗原以達到刺激NK細胞增殖和增強殺傷活性的目的。這種方法對于血液性腫瘤的療效不錯；但對胃癌和腸癌等抗原性較弱并且存在免疫逃逸的實體瘤，采用胃癌或腸癌細胞抗原刺激的NK細胞對實體腫瘤殺傷效果較差。

發明內容

有鑒于此，有必要針對上述的問題，提供一種致敏NK細胞的方法及組合物。

為了實現上述目的，本發明采用如下技術方案：

一種致敏NK細胞的組合物，包含實體瘤細胞抗原、CD28單抗、CD137單抗和桔紅素。實體瘤細胞抗原可以刺激NK細胞的擴增，還能夠使其識別特定種類的腫瘤細胞；CD28單抗可以增強NK細胞對腫瘤抗原的攝取能力，從而提高腫瘤抗原的致敏效果；桔紅素可以鞏固NK細胞對抗原的識別能力，同時避免NK細胞的自主凋亡；CD137單抗刺激NK細胞成熟和細胞因子的分泌。

優選地，所述致敏NK細胞的組合物各組分的濃度如下：

優選地，所述致敏NK細胞的組合物各組分的濃度如下：

優選地，所述致敏NK細胞的組合物中各組分的濃度如下：

一種致敏NK細胞的方法，包括以下步驟：

向NK細胞懸液中加入CD28單抗和實體瘤細胞抗原，在5％CO₂、37℃中培養24小時，再加入CD137單抗和桔紅素，繼續在5％CO₂、37℃中培養24小時。本發明致敏NK細胞的方法，先加入CD28單抗和實體瘤細胞抗原，以刺激NK細胞的識別功能，后加入CD137單抗和桔紅素，再刺激免疫細胞向NK細胞分化，分為兩步進行刺激，效率較高。

優選地，所述實體瘤細胞抗原通過以下方法制備：用5ml生理鹽水重懸1×10⁶個實體瘤細胞，加入凍存管中，放到液氮中冷凍，待細胞懸液完全凝結后取出，室溫解凍至完全融化，重復冷凍解凍過程至細胞完全裂解，最后一次解凍所獲得的液體離心去除沉淀，所得上清即為實體瘤細胞抗原。