[發明專利]一種致敏NK細胞的方法及組合物

有效

• 申請號: 201610088091.8
• 申請日: 2016-02-16
• 公開（公告）號: CN105505872B
• 公開（公告）日: 2019-01-15
• 發明（設計）人: 葛嘯虎;陳海佳;王一飛;萬樺;張維敏
• 申請（專利權）人: 廣州賽萊拉干細胞科技股份有限公司
• 主分類號: C12N5/0783
• 分類號: C12N5/0783;C12N1/38
• 代理公司: 北京市盈科律師事務所 11344
• 代理人: 劉雪花

1.一種致敏NK細胞的組合物，其特征在于，由實體瘤細胞抗原、CD28單抗、CD137單抗和桔紅素組成，各組分的濃度如下：

其中，所述實體瘤細胞抗原為胃癌細胞抗原或腸癌細胞抗原。

2.根據權利要求1所述的致敏NK細胞的組合物，其特征在于，各組分的濃度如下：

3.根據權利要求2所述的致敏NK細胞的組合物，其特征在于，各組分的濃度如下：

4.一種致敏NK細胞的方法，其特征在于，包括以下步驟：

使用權利要求1-3中任一項所述的致敏NK細胞的組合物致敏NK細胞，向NK細胞懸液中加入CD28單抗和實體瘤細胞抗原，在5％CO₂、37℃中培養24小時，再加入CD137單抗和桔紅素，繼續在5％CO₂、37℃中培養24小時；

所述實體瘤細胞抗原為MKN45胃癌細胞或HT29結腸癌細胞抗原。

5.根據權利要求4所述的致敏NK細胞的方法，其特征在于，所述實體瘤細胞抗原通過以下方法制備：用5ml生理鹽水重懸1×10⁶個實體瘤細胞，加入凍存管中，放到液氮中冷凍，待細胞懸液完全凝結后取出，室溫解凍至完全融化，重復冷凍解凍過程至細胞完全裂解，最后一次解凍所獲得的液體離心去除沉淀，所得上清即為實體瘤細胞抗原。

6.根據權利要求4所述的致敏NK細胞的方法，其特征在于，所述NK細胞通過以下方法制備：用Ficoll分離液法分離單個核細胞，用含20-80ng/ml的IL-2和20-80ng/ml的IL-15的X-VIVO 15培養基培養，每3天補液一次，培養至第14天。