[發明專利]克百威生物條形碼免疫分析測定試劑盒及其應用

有效

• 申請號: 201610086751.9
• 申請日: 2016-02-16
• 公開（公告）號: CN105699650B
• 公開（公告）日: 2018-09-07
• 發明（設計）人: 金茂俊;王靜;杜鵬飛;金芬;邵華;佘永新;鄭鷺飛;王珊珊
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院農業質量標準與檢測技術研究所
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/532
• 代理公司: 北京超凡志成知識產權代理事務所(普通合伙) 11371
• 代理人: 欒波

1.一種克百威生物條形碼免疫分析測定試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括盒體，所述盒體內包含有：

克百威標準品、克百威磁性納米探針、單標膠體金納米探針、克百威雙標膠體金納米探針、DNA生物芯片、銀染試劑；

所述單標膠體金納米探針由單鏈DNA1包被膠體金顆粒得到；所述膠體金顆粒的粒徑為13～15nm；

所述克百威雙標膠體金納米探針由抗克百威抗體和雙鏈DNA包被膠體金顆粒得到；所述抗克百威抗體為單克隆抗體；所述克百威雙標膠體金納米探針具體由以下方法制備得到：

1)、取膠體金溶液調pH至8.8～9.2后向其中加入抗克百威抗體，攪拌混合，靜置25～35min；然后加入硫醇修飾的單鏈DNA鏈，8～12℃靜置36～44h；再調整pH至7.3～7.5，在120～180min內分2～4次等量加入NaCl至濃度0.08～0.12mol/L，每次間隔40～60min，8000～11000r/min離心8～12min，棄上清，得到含寡核苷酸的膠體金；

2)、用牛血清白蛋白濃度為0.8～1.2％的磷酸鹽緩沖液重懸所述含寡核苷酸的膠體金，孵育1～3h；再加入與所述硫醇修飾的單鏈DNA鏈互補的生物條形碼DNA鏈，室溫雜交3～5h，8000～11000r/min離心，棄上清，得到所述克百威雙標膠體金納米探針；

所述DNA生物芯片由單鏈DNA2點制得到；

所述雙鏈DNA由硫醇修飾的單鏈DNA和條形碼單鏈DNA互補配對而成；所述單鏈DNA1和單鏈DNA2與所述條形碼單鏈DNA存在互補配對關系，且配對區域不重疊；

所述克百威磁性納米探針由磁性納米粒子和克百威完全抗原偶聯而成；所述克百威完全抗原由克百威和載體蛋白偶聯而成；所述載體蛋白為雞卵白蛋白；所述磁性納米粒子的粒徑為18～22nm。

2.權利要求1所述的克百威生物條形碼免疫分析測定試劑盒在克百威定性定量分析中的應用。

3.權利要求1所述的克百威生物條形碼免疫分析測定試劑盒測定克百威的方法，其特征在于，包括：

a)、將克百威標準品、提取與凈化后的待測樣品分別與等體積的克百威雙標膠體金探針和克百威磁性納米探針混合孵育；

b)、洗滌孵育產物并去雜化得到與各標準品與待測樣品對應的生物條形碼；

c)、將所述生物條形碼與DNA生物芯片雜交，并加入單標納米金探針放大信號；雜交反應結束后加入銀染試劑并用芯片掃描測定儀測定各孔灰度值；

d)、以克百威標準品的濃度為橫坐標，各濃度所對應的灰度抑制率為縱坐標，建立標準曲線，并根據標準曲線計算各樣品中的克百威濃度。