[發明專利]提高植物轉化效率的多個轉化增強子序列的應用

在審

• 申請號: 201610086188.5
• 申請日: 2007-07-18
• 公開（公告）號: CN105734079A
• 公開（公告）日: 2016-07-06
• 發明（設計）人: X·葉;L·吉爾伯森
• 申請（專利權）人: 孟山都技術有限公司
• 主分類號: C12N15/84
• 分類號: C12N15/84;C12N15/82;C12N5/10;C12N1/21;A01H5/00;C12R1/41;C12R1/01
• 代理公司: 北京市金杜律師事務所 11256
• 代理人: 孟凡宏;徐志明

1.提高根瘤菌介導的植物轉化效率的方法，其包括如下步驟：

用根瘤菌轉化植物細胞，所述根瘤菌包含植物轉化載體，該植物轉化載體含有至少一個T-DNA邊界序列和與所述T-DNA邊界序列可操作地連接的轉化增強子序列；

其中所述轉化增強子序列包含來自根瘤農桿菌的兩個或更多個拷貝的超驅動(OD)序列。

2.權利要求1的方法，其中所述OD序列包含SEQIDNO:20或與SEQIDNO:20互補的序列的共有核心序列。

3.權利要求2的方法，其中所述OD序列包含選自以下的序列：SEQIDNO:7、SEQIDNO:8、SEQIDNO:9、和與SEQIDNO:7、SEQIDNO:8和SEQIDNO:9中的任一個互補的序列。

4.權利要求1的方法，其中所述轉化增強子序列位于T-DNA右邊界(RB)序列的近端。

5.權利要求1的方法，其中所述OD序列來自根瘤農桿菌(A.tumefaciens)的胭脂堿或章魚堿Ti質粒。

6.權利要求1的方法，其中所述根瘤菌介導的轉化是農桿菌(Agrobacterium)、根瘤菌(Rhizobium)、中華根瘤菌(Sinorhizobium)、中間根瘤菌(Mesorhizobium)或慢生根瘤菌(Bradyrhizobium)介導的轉化。

7.權利要求1的方法，其中所述根瘤菌介導的轉化是農桿菌介導的轉化。

8.權利要求1的方法，其中所述植物細胞來自選自以下的植物：大豆、玉米、棉花、油菜、水稻、小麥、苜蓿、菜豆、花生、煙草、向日葵、大麥、甜菜、青花椰菜、甘藍、胡蘿卜、花椰菜、芹菜、大白菜、黃瓜、茄子、韭蔥、萵苣、甜瓜、燕麥、洋蔥、豌豆、胡椒、花生、馬鈴薯、西葫蘆、蘿卜、高粱、菠菜、南瓜、糖蘿卜、西紅柿和西瓜。

9.權利要求1的方法，其中所述轉化增強子序列包含SEQIDNO:10或與SEQIDNO:10互補的序列。

10.權利要求1的方法，其中所述植物細胞是玉米或者大豆細胞。

11.權利要求1的方法，其中所述轉化增強子序列包含2-約18個拷貝的所述OD序列。

12.權利要求1的方法，進一步包含以下步驟：

c)從所述植物細胞再生轉基因植株。

13.包含T-DNA邊界序列的重組DNA構建體，所述邊界序列可操作地連接到轉化增強子序列，該轉化增強子序列包含選自以下序列的兩個或更多個拷貝：SEQIDNO:7、SEQIDNO:8、SEQIDNO:9、與SEQIDNO:7、SEQIDNO:8和SEQIDNO:9中的任一個互補的序列、及它們的組合。

14.權利要求13的構建體，其中所述增強子序列包含所述序列的至少約四個拷貝。

15.權利要求13的構建體，其中所述邊界序列是右邊界(RB)序列。

16.權利要求13的構建體，其中所述邊界序列是左邊界(LB)序列。

17.權利要求13的構建體，其中所述構建體包含SEQIDNO:10。

18.權利要求15的構建體，其中所述RB序列來自胭脂堿Ti質粒。

19.權利要求15的構建體，其中所述RB序列來自章魚堿Ti質粒。

20.用權利要求13的構建體轉化的轉基因細胞。

21.權利要求20的細胞，限定為植物或者細菌細胞。

22.權利要求21的細胞，其中所述細胞是農桿菌細胞。

23.權利要求21的細胞，其中所述細胞是根瘤菌細胞。

24.權利要求21的細胞，其中植物細胞來自選自以下的植物：大豆、玉米、棉花、油菜、水稻、小麥、苜蓿、菜豆、花生、煙草、向日葵、大麥、甜菜、青花椰菜、甘藍、胡蘿卜、花椰菜、芹菜、大白菜、黃瓜、茄子、韭蔥、萵苣、甜瓜、燕麥、洋蔥、豌豆、胡椒、花生、馬鈴薯、西葫蘆、蘿卜、高粱、菠菜、南瓜、糖蘿卜、西紅柿和西瓜。

25.用權利要求13的構建體轉化的轉基因植株。

26.權利要求25的轉基因植株，限定為選自：大豆、玉米、棉花、油菜、水稻、小麥、苜蓿、菜豆、花生、煙草、向日葵、大麥、甜菜、青花椰菜、甘藍、胡蘿卜、花椰菜、芹菜、大白菜、黃瓜、茄子、韭蔥、萵苣、甜瓜、燕麥、洋蔥、豌豆、胡椒、花生、馬鈴薯、西葫蘆、蘿卜、高粱、菠菜、南瓜、糖蘿卜、西紅柿和西瓜。