[發明專利]檢測草莓是否感染草莓鑲脈病毒的引物、檢測試劑盒及其方法

在審

• 申請號: 201610084545.4
• 申請日: 2016-02-04
• 公開（公告）號: CN105463137A
• 公開（公告）日: 2016-04-06
• 發明（設計）人: 馬建忠;鄧子兵;王永剛;陳妤;王文銀;潘博;李印武
• 申請（專利權）人: 蘭州理工大學
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 杭州智羚知識產權代理有限公司 33250
• 代理人: 劉芬豪

技術領域

本發明涉及生物技術領域，涉及檢測草莓是否感染草莓鑲脈病毒的引物， 還涉及檢測草莓是否感染草莓鑲脈病毒的方法，尤其涉及檢測草莓是否感染草 莓鑲脈病毒的檢測試劑盒。

背景技術

草莓病毒病主要表現出黃化和縮葉兩種癥狀類型。草莓病毒病危害面廣，在 世界草莓種植區出現的病毒病大約有20多種，其中侵染我國草莓的6種主要病 毒有：草莓斑駁病毒(Strawberrymottlevirus，SmoV)、草莓輕型黃邊病毒 (Strawberrymildyellowedgevirus，SMTEV)、草莓鑲脈病毒(Strawberryveinband virus，SVBV)、草莓皺縮病毒(Strawberrycrinklevirus，SCrV)、草莓輕型黃邊伴隨 病毒(strawberrymiIdyeIIowedge-associatedvirus，SYYEaV)和草莓潛隱環斑 病毒(strawberryIatentringspotvirus，SLRSV)，這6種病毒總侵染率達80.2％， 單病毒的侵染率達41.6％，兩種及兩種以上病毒的復合侵染率達30.6％。

病毒感染草莓后，會否產生病癥主要取決于病毒的致病性和宿主的免疫力。

病毒病的致病機理主要在于三個方面：一是病毒粒體在宿主體內迅速繁殖， 不僅消耗了大量能量和蛋白質，而且占用了宿主的核糖體、tRNA、dNTPs等各 種資源用于合成子代病毒粒體，影響植株的生長發育和代謝；二是病毒粒體直 接損傷宿主細胞，比如釋放子代病毒時破壞細胞膜，引發宿主防御機制啟動導 致細胞凋亡，病毒基因整合至宿主基因組中從而改變細胞遺傳特性導致細胞分 裂異常等；三是病毒粒體代謝時常產生多種醛類醌類大分子有毒物質，加速宿 主細胞的衰老和死亡，有時病毒粒體的代謝物還會激活某些氧化酶進而影響葉 綠體的生理功能。綜合以上三個方面作用，最終導致感病植株生長緩慢，葉片 褪綠、繁殖力減弱、產量下降，果實畸形，死亡率升高等。

草莓鑲脈病毒(Strawberryveinbandingvirus，SVBV，又稱StYVBV、StCVBV、 StEVBV)自然界中只能傳染草莓，是草莓病毒中唯一一種屬于花椰菜花葉病毒 屬的雙鏈DNA病毒，與CaMV有近親緣關系，也是危害我國草莓生產的主要病 毒之一。典型鑲脈癥狀只表現在指示植物森林草莓(F.vesca)和弗州草莓 (F.virginiana)上。SVBV為球形粒體，直徑約45～50nm，DNA雙鏈上各有一個缺 口，區別于其他花椰菜花葉病毒科家族成員。Petrizik等人完成了全世界首個的 SVBV全序列(GenBank登錄號：X97304)測定工作，結果表明SVBV基因組全長 為7876bp，含有7個ORFs。

發明內容

本發明針對現有技術的缺點，公開了檢測草莓是否感染草莓鑲脈病毒的引 物，公開了檢測草莓是否感染草莓鑲脈病毒的方法；還公開了檢測草莓是否感 染草莓鑲脈病毒的檢測試劑盒。

為了解決上述技術問題，本發明通過下述技術方案得以解決。

檢測草莓是否感染草莓鑲脈病毒的引物，設計的引物為：

SVBV4上游引物為CTAACTATCTTACACAGGGAAC，SVBV4下游引物為 GTCCGATCTCATTACAAATCCA；

SVBV6上游引物為ATCATACAAGAAGACCGCAAC，SVBV6下游引物為 TTTCACCACTCTAGCTGCCTC。本發明通過PCR反應體系進行瓊脂糖凝膠電 泳，并以電泳圖樣中是否含有以上兩個基因(草莓鑲脈病毒外殼蛋白基因和第 六個閱讀框基因)的目的條帶確定草莓植株是否感染草莓鑲脈病毒(SVBV)。

檢測草莓是否感染草莓鑲脈病毒的方法，包括，

步驟一.設計的引物為：

SVBV4上游引物為CTAACTATCTTACACAGGGAAC，SVBV4下游引物為 GTCCGATCTCATTACAAATCCA；

SVBV6上游引物為ATCATACAAGAAGACCGCAAC，SVBV6下游引物為 TTTCACCACTCTAGCTGCCTC；

步驟二.提取草莓樣品的DNA，加入草莓樣品DNA、設計的引物以PCR 法進行樣品DNA的擴增和檢測；