[發明專利]以miR-155前體為模板制備RNA探針的方法在審
| 申請號： | 201610083241.6 | 申請日： | 2016-02-05 |
| 公開（公告）號： | CN105586335A | 公開（公告）日： | 2016-05-18 |
| 發明（設計）人： | 徐學明;魯隼;馮俊清 | 申請（專利權）人： | 廣州復能基因有限公司 |
| 主分類號： | C12N15/10 | 分類號： | C12N15/10;C12Q1/68 |
| 代理公司： | 廣州三環專利代理有限公司 44202 | 代理人： | 劉宇峰 |
| 地址： | 510663 廣東省廣*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | mir 155 模板 制備 rna 探針 方法 | ||
1.一種以miR-155前體為模板制備RNA探針的方法，其特征在于，包括以 下步驟：
A.針對miR-155前體序列設計至少一對引物，所述引物的PCR擴增產物 為多重DNA片段，所述多重DNA片段能包括所有靶序列；
B.從miR-155前體cDNA質粒中，采用步驟A的所述引物，通過PCR擴 增得到所述多重DNA片段，純化后混合，作為模板；
C.加入RNA聚合酶和帶有生物素標記的UTP進行反應，將UTP摻入產物， 純化后得到RNA探針。
2.根據權利要求1所述的以miR-155前體為模板制備RNA探針的方法，其 特征在于，所述RNA聚合酶是T7RNA聚合酶，引物的5'端加上T7啟動子序 列。
3.根據權利要求1所述的以miR-155前體為模板制備RNA探針的方法，其 特征在于，所述RNA聚合酶是SP6RNA聚合酶，引物的5'端分別加上SP6啟 動子序列。
4.根據權利要求1所述的以miR-155前體為模板制備RNA探針的方法，其 特征在于，所述RNA聚合酶是T3RNA聚合酶，引物的5'端分別加上T3啟動 子序列。
5.根據權利要求1所述的以miR-155前體為模板制備RNA探針的方法，其 特征在于，所述RNA聚合酶是TrcRNA聚合酶，引物的5'端分別加上Trc啟動 子序列。
6.一種快速檢測胰腺癌相關的miR-155表達的試劑盒，其特征在于：包括 根據權利要求1所述的方法所制備的RNA探針。
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