[發明專利]一種高純度灰樹花多酚組分的制備方法

有效

• 申請號: 201610082919.9
• 申請日: 2016-02-06
• 公開（公告）號: CN105732250B
• 公開（公告）日: 2018-03-09
• 發明（設計）人: 呂旭聰;劉斌;賈瑞博;李燕;周文斌;陳竟豪;林占熺
• 申請（專利權）人: 福建農林大學
• 主分類號: C07B63/00
• 分類號: C07B63/00;C07D493/06;C07D311/30;C07D311/40;C07D311/62;C07H13/08;C07H17/07;C07H1/06;C07C37/82;C07C39/08;C07C51/47;C07C59/52;C07C59/64
• 代理公司: 福州元創專利商標代理有限公司35100
• 代理人: 蔡學俊

技術領域

本發明涉及一種高純度灰樹花多酚組分的制備方法，屬于功能食品的功能因子和藥物領域。

背景技術

灰樹花（Grifola frondosa）屬擔子菌亞門層菌綱非褶菌目多孔菌科樹花菌屬真菌，主要生長在亞熱帶至溫帶，在我國主要分布于福建、河北、吉林、廣西和四川等地。作為一種珍貴的食、藥兼用蕈菌，灰樹花的多種營養素和生理功效成分居各種食用菌之首，素有“食用菌王子”和“華北人參”之美譽。相關研究表明，灰樹花具有增強免疫力、抑制腫瘤、抗病毒、抗氧化防衰老、穩定血壓、降血糖血脂、改善脂肪代謝及緩解肝炎癥狀、增強記憶力等多種醫療保健功效。大量研究工作表明，多酚類物質具有抗氧化、抑菌、抗誘變、抗病毒、抗腫瘤、降血糖降血脂等多種功能活性。國內外對于灰樹花多酚的研究報道較少。陳向東等人采用弱極性的大孔吸附樹脂從灰樹花菌絲體粗提物中分離制備多酚類組分，獲得的組分是褐色粉末狀產物，經驗證具有抗氧化、抗菌及α-淀粉酶抑制等活性，但其制得的灰樹花多酚是混合物，對灰樹花多酚類物質的組分未做進一步純化和鑒定，灰樹花多酚組分有待進一步分離提純（陳向東，劉曉雯，吳梧桐. 灰樹花多酚的提取和活性研究. 食品與生物技術學報, 2005, 24 (4): 26-30.）。

本發明提出以灰樹花子實體為原料，通過超聲波輔助浸提技術制備灰樹花多酚組分，利然后用超濾膜截留技術去除其中的多糖和蛋白等生物大分子，最后采用大孔吸附樹脂NKA-Ⅱ柱層析-制備型高效液相色譜的串聯分離純化技術，制備多種高純度的灰樹花多酚類化合物單體。相比以往從灰樹花菌絲體中提取多酚類物質，該發明采用以灰樹花子實體為原料，原料來源更容易獲得且多酚含量相比菌絲體來得高，多酚的提取得率也更高；與現有的研究報道相比，采用超濾膜過濾所制得的灰樹花多酚組分去除了灰樹花提取物中的多糖、蛋白等大分子物質，經柱層析-制備型液相色譜串聯純化技術純化粗多酚組分，所制得的多酚組分純度更高（純度均大于95%），純化后的多酚體外抗氧化活性也顯著性提高，其中還原力均比等質量濃度（1 mg/mL）的抗壞血酸強。

發明內容

本發明的目的是提供一種快速高效、純度高、制備量較大的灰樹花多酚類化合物單體的制備工藝。

一種高純度灰樹花多酚組分的制備方法，其制備步驟如下：

（1）預處理：將灰樹花子實體干制品粉碎成粉末，過40～80目篩備用；

（2）浸提：取一定量的灰樹花粉末，利用超聲波輔助提取技術浸提2-4次，合并提取液，經板框過濾去除殘渣；

（3）膜過濾：通過膜過濾裝置進行過濾，截留蛋白及多糖，獲得的濾液經濃縮、干燥后獲得灰樹花多酚粗提物；

（4）分離純化：將灰樹花多酚粗提物復溶于去離子水中，采用柱層析-制備型高效液相色譜串聯分離純化技術進行分離純化。

本發明所述的超聲輔助浸提的條件為：以水為提取溶劑，料液重量比為1：10-1：50，超聲溫度30-70℃，超聲時間30-90 min，超聲功率100-400w。

本發明所述的過濾膜為截留分子量為5 kD的超濾膜，濾液所采用的干燥方法為真空冷凍干燥或離心噴霧干燥。

本發明所述的柱層析的填料為NKA-Ⅱ型大孔吸附樹脂，上樣速度3 BV/h，吸附時間2 h，洗脫溶劑為20%-60%乙醇溶液，洗脫速度3 BV/h；經吸附、洗脫收集洗脫液，減壓濃縮至干得粗品，以50%甲醇復溶后經0.45 μm濾膜過濾。

本發明所述的液相色譜條件為：制備型反相C18色譜柱，色譜柱規格：內徑20 mm、長度250 mm、C18硅膠填料粒徑5 μm，檢測波長280nm，進樣量1 mL，流速5-10 mL/min，柱溫30℃，采用 A: 甲醇-B: 0.1%甲酸進行線性梯度洗脫，洗脫程序為

（1）0～30 min：A: 5%+B: 95%→A: 60%+B: 40%；

（2）30～35 min：A: 60%+B: 40%→A: 5%+B: 95%；

（3）35～45 min：A: 5%+B: 95%。