[發(fā)明專(zhuān)利]一種高純度灰樹(shù)花多酚組分的制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610082919.9
• 申請(qǐng)日: 2016-02-06
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN105732250B
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-03-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 呂旭聰;劉斌;賈瑞博;李燕;周文斌;陳竟豪;林占熺
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 福建農(nóng)林大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C07B63/00
• 分類(lèi)號(hào): C07B63/00;C07D493/06;C07D311/30;C07D311/40;C07D311/62;C07H13/08;C07H17/07;C07H1/06;C07C37/82;C07C39/08;C07C51/47;C07C59/52;C07C59/64
• 代理公司: 福州元?jiǎng)?chuàng)專(zhuān)利商標(biāo)代理有限公司35100
• 代理人: 蔡學(xué)俊

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種高純度灰樹(shù)花多酚組分的制備方法，屬于功能食品的功能因子和藥物領(lǐng)域。

背景技術(shù)

灰樹(shù)花（Grifola frondosa）屬擔(dān)子菌亞門(mén)層菌綱非褶菌目多孔菌科樹(shù)花菌屬真菌，主要生長(zhǎng)在亞熱帶至溫帶，在我國(guó)主要分布于福建、河北、吉林、廣西和四川等地。作為一種珍貴的食、藥兼用蕈菌，灰樹(shù)花的多種營(yíng)養(yǎng)素和生理功效成分居各種食用菌之首，素有“食用菌王子”和“華北人參”之美譽(yù)。相關(guān)研究表明，灰樹(shù)花具有增強(qiáng)免疫力、抑制腫瘤、抗病毒、抗氧化防衰老、穩(wěn)定血壓、降血糖血脂、改善脂肪代謝及緩解肝炎癥狀、增強(qiáng)記憶力等多種醫(yī)療保健功效。大量研究工作表明，多酚類(lèi)物質(zhì)具有抗氧化、抑菌、抗誘變、抗病毒、抗腫瘤、降血糖降血脂等多種功能活性。國(guó)內(nèi)外對(duì)于灰樹(shù)花多酚的研究報(bào)道較少。陳向東等人采用弱極性的大孔吸附樹(shù)脂從灰樹(shù)花菌絲體粗提物中分離制備多酚類(lèi)組分，獲得的組分是褐色粉末狀產(chǎn)物，經(jīng)驗(yàn)證具有抗氧化、抗菌及α-淀粉酶抑制等活性，但其制得的灰樹(shù)花多酚是混合物，對(duì)灰樹(shù)花多酚類(lèi)物質(zhì)的組分未做進(jìn)一步純化和鑒定，灰樹(shù)花多酚組分有待進(jìn)一步分離提純（陳向東，劉曉雯，吳梧桐. 灰樹(shù)花多酚的提取和活性研究. 食品與生物技術(shù)學(xué)報(bào), 2005, 24 (4): 26-30.）。

本發(fā)明提出以灰樹(shù)花子實(shí)體為原料，通過(guò)超聲波輔助浸提技術(shù)制備灰樹(shù)花多酚組分，利然后用超濾膜截留技術(shù)去除其中的多糖和蛋白等生物大分子，最后采用大孔吸附樹(shù)脂NKA-Ⅱ柱層析-制備型高效液相色譜的串聯(lián)分離純化技術(shù)，制備多種高純度的灰樹(shù)花多酚類(lèi)化合物單體。相比以往從灰樹(shù)花菌絲體中提取多酚類(lèi)物質(zhì)，該發(fā)明采用以灰樹(shù)花子實(shí)體為原料，原料來(lái)源更容易獲得且多酚含量相比菌絲體來(lái)得高，多酚的提取得率也更高；與現(xiàn)有的研究報(bào)道相比，采用超濾膜過(guò)濾所制得的灰樹(shù)花多酚組分去除了灰樹(shù)花提取物中的多糖、蛋白等大分子物質(zhì)，經(jīng)柱層析-制備型液相色譜串聯(lián)純化技術(shù)純化粗多酚組分，所制得的多酚組分純度更高（純度均大于95%），純化后的多酚體外抗氧化活性也顯著性提高，其中還原力均比等質(zhì)量濃度（1 mg/mL）的抗壞血酸強(qiáng)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種快速高效、純度高、制備量較大的灰樹(shù)花多酚類(lèi)化合物單體的制備工藝。

一種高純度灰樹(shù)花多酚組分的制備方法，其制備步驟如下：

（1）預(yù)處理：將灰樹(shù)花子實(shí)體干制品粉碎成粉末，過(guò)40～80目篩備用；

（2）浸提：取一定量的灰樹(shù)花粉末，利用超聲波輔助提取技術(shù)浸提2-4次，合并提取液，經(jīng)板框過(guò)濾去除殘?jiān)?/p>

（3）膜過(guò)濾：通過(guò)膜過(guò)濾裝置進(jìn)行過(guò)濾，截留蛋白及多糖，獲得的濾液經(jīng)濃縮、干燥后獲得灰樹(shù)花多酚粗提物；

（4）分離純化：將灰樹(shù)花多酚粗提物復(fù)溶于去離子水中，采用柱層析-制備型高效液相色譜串聯(lián)分離純化技術(shù)進(jìn)行分離純化。

本發(fā)明所述的超聲輔助浸提的條件為：以水為提取溶劑，料液重量比為1：10-1：50，超聲溫度30-70℃，超聲時(shí)間30-90 min，超聲功率100-400w。

本發(fā)明所述的過(guò)濾膜為截留分子量為5 kD的超濾膜，濾液所采用的干燥方法為真空冷凍干燥或離心噴霧干燥。

本發(fā)明所述的柱層析的填料為NKA-Ⅱ型大孔吸附樹(shù)脂，上樣速度3 BV/h，吸附時(shí)間2 h，洗脫溶劑為20%-60%乙醇溶液，洗脫速度3 BV/h；經(jīng)吸附、洗脫收集洗脫液，減壓濃縮至干得粗品，以50%甲醇復(fù)溶后經(jīng)0.45 μm濾膜過(guò)濾。

本發(fā)明所述的液相色譜條件為：制備型反相C18色譜柱，色譜柱規(guī)格：內(nèi)徑20 mm、長(zhǎng)度250 mm、C18硅膠填料粒徑5 μm，檢測(cè)波長(zhǎng)280nm，進(jìn)樣量1 mL，流速5-10 mL/min，柱溫30℃，采用 A: 甲醇-B: 0.1%甲酸進(jìn)行線性梯度洗脫，洗脫程序?yàn)?/p>

（1）0～30 min：A: 5%+B: 95%→A: 60%+B: 40%；

（2）30～35 min：A: 60%+B: 40%→A: 5%+B: 95%；

（3）35～45 min：A: 5%+B: 95%。