[發(fā)明專(zhuān)利]一種抗PEG苜蓿愈傷組織再分化的方法在審
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201610082224.0 | 申請(qǐng)日： | 2016-02-05 |
| 公開(kāi)（公告）號(hào)： | CN105660404A | 公開(kāi)（公告）日： | 2016-06-15 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 李波;賈秀峰;趙宇佳;徐婉玉;馬赫;陳雪梅 | 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人： | 齊齊哈爾大學(xué) |
| 主分類(lèi)號(hào)： | A01H4/00 | 分類(lèi)號(hào)： | A01H4/00;A01H1/06 |
| 代理公司： | 哈爾濱市松花江專(zhuān)利商標(biāo)事務(wù)所 23109 | 代理人： | 侯靜 |
| 地址： | 161006 黑龍江*** | 國(guó)省代碼： | 黑龍江;23 |
| 權(quán)利要求書(shū)： | 查看更多 | 說(shuō)明書(shū)： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 peg 苜蓿 組織 再分 方法 | ||
1.一種抗PEG苜蓿愈傷組織再分化的方法，其特征在于是通過(guò)下列步驟實(shí)現(xiàn)：
一、將經(jīng)NaN3誘變和PEG脅迫處理后的苜蓿愈傷組織接種于MS固體培養(yǎng)基中,在23～ 25℃下培養(yǎng),每日光照射12h，1000Lx光照強(qiáng)度，培養(yǎng)18～22d完成1次繼代，重復(fù)繼代 培養(yǎng)多次，得到繼代培養(yǎng)后的愈傷組織；
二、將步驟一得到的繼代培養(yǎng)后的愈傷組織分割成塊狀，然后接種到含有NAA和6-BA 的芽分化MS培養(yǎng)基上，在溫度為23～25℃，每日光照射16h，2000～4000Lx光照度的條 件下進(jìn)行培養(yǎng)，得到分化出芽的苜蓿組織；
三、將分化出芽的苜蓿組織在分芽處切斷成兩段，分段后移接到以1/2MS或MS為基本 培養(yǎng)基的生根培養(yǎng)基上，在溫度為23～25℃，1000～2000Lx的光照度，每天光照16h的 條件下在培養(yǎng)瓶中進(jìn)行培養(yǎng)，得到分化出根的無(wú)菌苗；
四、當(dāng)分化出根的無(wú)菌苗長(zhǎng)到2～3cm并有4～5條粗壯根系時(shí)，在培養(yǎng)室內(nèi)將培養(yǎng)瓶 口打開(kāi)，進(jìn)行2～5d的煉苗，然后挑選株高為4～5cm，并有4～5條粗壯根系的幼苗移栽 到營(yíng)養(yǎng)土中進(jìn)行培養(yǎng)，完成抗PEG苜蓿愈傷組織的再分化；
其中步驟二所述的芽分化MS培養(yǎng)基為MS+2.0mg/L6-BA+0.2mg/LNAA+30g/L蔗糖+ 10g/L瓊脂；
當(dāng)步驟三所述的生根培養(yǎng)基以1/2MS為基本培養(yǎng)基時(shí)，生根培養(yǎng)基為1/2MS+0.15mg/L NAA+30g/L蔗糖+30g/L瓊脂+0.5g/L活性炭或1/2MS+0.05mg/LNAA+1.5mg/LIBA+30g/L 蔗糖+10g/L瓊脂+0.5g/L活性炭；
當(dāng)步驟三所述的生根培養(yǎng)基以MS為基本培養(yǎng)基時(shí)，生根培養(yǎng)基中含有0.05～0.10mg/L NAA、1.0～1.5mg/LIBA、0～2mg/L6-BA、30g/L蔗糖、30g/L瓊脂、0.5g/L的活性炭 和15ml鐵鹽母液，其中所述的鐵鹽母液是將2～3gFeSO4·7H2O和3～4gNa2-EDTA溶于1L 去離子水中得到的。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種抗PEG苜蓿愈傷組織再分化的方法，其特征在于步驟一 所述的經(jīng)NaN3誘變和PEG脅迫處理后的苜蓿愈傷組織按下列步驟實(shí)現(xiàn)：將苜蓿愈傷組織分 割成塊狀，然后轉(zhuǎn)入含有濃度為200mg/LNaN3的液體誘變培養(yǎng)基中進(jìn)行振蕩培養(yǎng)，靜止1h 后得到誘變后的愈傷組織，再將誘變后的愈傷組織轉(zhuǎn)入含有8mmol/L的L-Hyp和質(zhì)量百 分含量為30％PEG的含PEG的MS培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，存活的愈傷組織再轉(zhuǎn)入MS固體培養(yǎng)基 中培養(yǎng)，依次在含PEG的MS培養(yǎng)基和MS固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)進(jìn)行交替篩選。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種抗PEG苜蓿愈傷組織再分化的方法，其特征在于步驟一 所述的MS固體培養(yǎng)基為MS+0.5mg/L6-BA+2.0mg/L2,4-D+30g蔗糖+0.8％瓊脂,pH＝5.8。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種抗PEG苜蓿愈傷組織再分化的方法，其特征在于步驟二 繼代培養(yǎng)后的愈傷組織分割成0.5cm3的塊狀。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種抗PEG苜蓿愈傷組織再分化的方法，其特征在于將步驟 二得到的分化出芽的苜蓿組織再轉(zhuǎn)入壯芽培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，壯芽培養(yǎng)基為：MS+2.0mg/L 6-BA+30g/L蔗糖+10g/L瓊脂。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種抗PEG苜蓿愈傷組織再分化的方法，其特征在于步驟三 所述的鐵鹽母液是將2.78gFeSO4·7H2O和3.73gNa2-EDTA溶于1L去離子水中得到的。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種抗PEG苜蓿愈傷組織再分化的方法，其特征在于步驟三 的生根培養(yǎng)基為MS+1.5mg/LIBA+0.05mg/LNAA+2.00mg/L6-BA+15ml鐵鹽母液+30g/L 蔗糖+10g/L瓊脂+0.5g/L活性炭。
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