[發(fā)明專利]用于稻田廣食性捕食天敵獵物多樣性高通量測(cè)序的復(fù)合標(biāo)簽及其應(yīng)用有效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201610081432.9 | 申請(qǐng)日： | 2016-02-04 |
| 公開(kāi)（公告）號(hào)： | CN105567843B | 公開(kāi)（公告）日： | 2019-01-11 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 王光華;高其康;王雪芹;祝增榮;程家安 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 浙江大學(xué) |
| 主分類號(hào)： | C12Q1/6869 | 分類號(hào)： | C12Q1/6869;C12N15/11 |
| 代理公司： | 杭州天勤知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 33224 | 代理人： | 胡紅娟 |
| 地址： | 310027 浙*** | 國(guó)省代碼： | 浙江;33 |
| 權(quán)利要求書(shū)： | 查看更多 | 說(shuō)明書(shū)： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 用于 稻田 食性 捕食 天敵 獵物 多樣性 通量 復(fù)合 標(biāo)簽 及其 應(yīng)用 | ||
1.一種用于稻田廣食性捕食天敵獵物多樣性高通量測(cè)序的復(fù)合標(biāo)簽，其特征在于，其堿基序列如如下序列編號(hào)NO.1～NO.48所示：
2.一種利用權(quán)利要求1所述復(fù)合標(biāo)簽進(jìn)行超高通量基因測(cè)序的方法，其特征在于，包括如下步驟：
(1)提取每一個(gè)樣本的總DNA；所述樣本為稻田廣食性捕食天敵的樣本；
(2)對(duì)每一個(gè)樣本，從權(quán)利要求1中所示48對(duì)且未被選擇過(guò)的序列中選擇任意一對(duì)序列作為引物，對(duì)對(duì)應(yīng)樣本的總DNA進(jìn)行擴(kuò)增；對(duì)對(duì)應(yīng)樣本的總DNA進(jìn)行擴(kuò)增的PCR擴(kuò)增體系為：
1μL樣本總DNA，25μL 2×Buffer，10μL dNTP，1μL KOD FX酶，濃度為10μM上下游引物各5μL，補(bǔ)水至50μL；
(3)對(duì)每一個(gè)樣本的擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行電泳檢測(cè)，對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行純化回收；
(4)對(duì)每個(gè)樣本純化回收后的產(chǎn)物進(jìn)行精確定量；
(5)將所有樣本等量混合后建立一個(gè)測(cè)序文庫(kù)；
(6)對(duì)所建測(cè)序文庫(kù)進(jìn)行高通量測(cè)序。
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