[發(fā)明專利]干擾ABCB5基因表達(dá)的載體及其在腫瘤干細(xì)胞治療中的應(yīng)用有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201610081082.6 | 申請日： | 2016-02-04 |
| 公開（公告）號： | CN105734075B | 公開（公告）日： | 2020-06-09 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 華子春;張曉昕;程俠衛(wèi) | 申請（專利權(quán)）人： | 南京大學(xué) |
| 主分類號： | C12N15/74 | 分類號： | C12N15/74;C12N15/66;A61K31/7088;A61K48/00;A61P35/00;A61K31/675;A61K31/704;A61K31/337 |
| 代理公司： | 江蘇銀創(chuàng)律師事務(wù)所 32242 | 代理人： | 何震花 |
| 地址： | 210093 江蘇省南京市*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 干擾 abcb5 基因 表達(dá) 載體 及其 腫瘤 干細(xì)胞 治療 中的 應(yīng)用 | ||
1.一種干擾ABCB5基因表達(dá)的載體，其特征在于：載體含有干擾ABCB5基因表達(dá)的核苷酸序列，所述干擾ABCB5基因表達(dá)的核苷酸序列為包含RNA的正義鏈、發(fā)夾結(jié)構(gòu)和反義鏈的如SEQ ID NO：1 所示的核苷酸序列。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的干擾ABCB5基因表達(dá)的載體，其特征在于：擴(kuò)增所述干擾ABCB5基因表達(dá)的核苷酸序列的上游引物序列是如SEQ ID NO: 4 所示的核苷酸序列，下游引物序列是如SEQ ID NO: 5 所示的核苷酸序列；所述干擾ABCB5基因表達(dá)的核苷酸序列中發(fā)夾結(jié)構(gòu)的核苷酸序列是如SEQ ID NO: 3 所示的核苷酸序列。
3.權(quán)利要求2所述的干擾ABCB5基因表達(dá)的載體的構(gòu)建方法，其特征在于包括如下步驟：
（1）上、下游引物退火，形成含有如SEQ ID NO: 2 所示核苷酸序列的雙鏈；
（2）退火完成的雙鏈和載體用BamHI和HindIII酶切；
（3）酶切后的雙鏈與載體連接；
（4）將連接后的載體轉(zhuǎn)化到大腸桿菌中，進(jìn)行單克隆篩選和擴(kuò)增；
（5）對獲得的單克隆進(jìn)行DNA序列測定分析。
4.權(quán)利要求1 所述的干擾ABCB5基因表達(dá)的載體在制備針對黑色素瘤干細(xì)胞藥物中的應(yīng)用。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于干擾ABCB5基因表達(dá)的載體以乏氧特異性的減毒沙門氏菌VNP20009為載體。
6.權(quán)利要求1所述的干擾ABCB5基因表達(dá)的載體在制備降低腫瘤對化療耐受的藥物中的應(yīng)用。
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