[發明專利]干擾ABCB5基因表達的載體及其在腫瘤干細胞治療中的應用

有效

• 申請號: 201610081082.6
• 申請日: 2016-02-04
• 公開（公告）號: CN105734075B
• 公開（公告）日: 2020-06-09
• 發明（設計）人: 華子春;張曉昕;程俠衛
• 申請（專利權）人: 南京大學
• 主分類號: C12N15/74
• 分類號: C12N15/74;C12N15/66;A61K31/7088;A61K48/00;A61P35/00;A61K31/675;A61K31/704;A61K31/337
• 代理公司: 江蘇銀創律師事務所 32242
• 代理人: 何震花

本發明公開了一種干擾ABCB5基因表達的載體及其在腫瘤干細胞治療中的應用。本發明的一種干擾ABCB5基因表達的載體，包括發夾結構，所述干擾ABCB5基因表達的載體的核苷酸序列如序列表中的SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列。本發明所述的干擾ABCB5基因表達的載體在制備針對黑色素瘤干細胞治療藥物中的應用。本發明提供了一種全新的、高效的、安全的、低廉的、方便的干擾小鼠黑色素瘤干細胞基因ABCB5表達的載體及其應用。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體涉及干擾ABCB5基因表達的載體及其在腫瘤干細胞治療中的應用。

背景技術

黑色素瘤是皮膚癌中最危險的一種，其惡性程度高，侵襲性強，是皮膚癌死亡的主要原因之一。近年來隨著我國經濟的發展，人民生活習慣的變化，惡性黑色瘤已成為我國所有惡性腫瘤中發病率增長最快者之一。由于惡性黑色素瘤早期癥狀較輕，不易引起患者重視，容易錯過早期診斷和治療。惡性黑色素瘤一旦發生轉移，病情進展迅速，放化療效果差，死亡率高。目前主要治療黑色素瘤的化療藥物包括亞硝基脲類、紫杉醇、長春生物堿等，但是這些藥物都沒有顯著提高黑色素瘤病人的生存率，究其原因，發現腫瘤細胞對化療藥物產生耐受是限制其療效的主要原因，因此迫切需要解決黑色素瘤對化療藥物耐受的問題。

越來越多研究表明腫瘤內存在一類腫瘤干細胞，這類細胞與腫瘤化學治療的耐藥現象相關。腫瘤干細胞一般處于靜止狀態，過表達抗凋亡蛋白和三磷酸腺苷結合盒轉運蛋白等而獲得耐藥性。因此針對不同腫瘤干細胞的耐藥機制，制定出相應的耐藥治療策略，可以增加化療效果，提高患者生存時間。

RNA 干擾是將雙鏈RNA(double strained RNA，dsRNA) 導入細胞內引起特異靶基因mRNA 降解的一種細胞反應過程，它是一種轉錄后的基因沉默(PTGS) 現象。關于RNAi 機制的探討還不夠完善，目前研究比較明確的結論是：Dicer 是特異性核糖核酸酶家族的一個成員，與內源性mRNA 互補的外源性dsRNA 與Dicer 結合，被切割成2l ～ 23nt 長的小片段，即小分子干擾核糖核酸(siRNA)。一部分siRNA 與Dicer 形成RNA 誘導的沉默復合體(RNA-inducing silencing complex，RISC)，RISC 再與目標基因轉錄出的mRNA 結合并降解該mRNA ；部分siRNA 可作為引物，以mRNA 為模板合成新的dsRNA，這些新合成的dsRNA又可以與Dicer 結合并被切割成siRNA，從而產生級連、放大和傳遞效應，沉默該基因。

目前臨床研究試圖通過ABC轉運體蛋白抑制劑聯合化療藥物克服腫瘤干細胞耐藥性，然而臨床效果甚微，推測其原因可能有抑制劑與其他化療藥物聯用影響了其藥物動力學，以及ABC抑制劑可能不能有效殺死腫瘤干細胞等；除此以外，ABC轉運蛋白在血腦屏障，胎盤中高表達以避免血液中有毒物質影響，因此需要設計一個針對腫瘤干細胞的干擾系統，特異性殺傷腫瘤干細胞，改善其對化療藥物的耐受而避免對正常干細胞的毒害。

目前，缺乏一種高效的干擾ABCB5基因表達的載體及其在腫瘤干細胞治療中的應用。

發明內容

為解決上述問題，本發明的目的是提供一種高效安全的干擾ABCB5基因表達的載體及其在腫瘤干細胞治療中的應用。

進一步地，本發明提供了一種克服黑色素瘤對化療藥物耐受的方法。

為實現上述技術目的，本發明采用的技術方案如下：本發明的一種干擾ABCB5基因表達的載體，包括發夾結構，其特征在于：所述干擾ABCB5基因表達的載體的核苷酸序列如序列表中的SEQ ID NO ：1 所示的核苷酸序列。

進一步地，所述干擾ABCB5基因表達的載體的上游引物序列是SEQ ID NO: 4 所示的核苷酸序列，所述干擾ABCB5基因表達的載體的下游引物序列是SEQ ID NO: 5 所示的核苷酸序列；所述干擾ABCB5基因表達的載體的發夾結構的核苷酸序列是SEQ ID NO: 3 所示的核苷酸序列。