[發明專利]一種

有效

• 申請號: 201610080572.4
• 申請日: 2016-02-04
• 公開（公告）號: CN105669855B
• 公開（公告）日: 2020-02-11
• 發明（設計）人: 陸春雄;蔣泉福;俞惠新;華子春;胡敏進;譚成
• 申請（專利權）人: 江蘇省原子醫學研究所;江蘇靶標生物醫藥研究所有限公司
• 主分類號: C07K14/47
• 分類號: C07K14/47;C07K1/13;A61K51/08
• 代理公司: 11250 北京三聚陽光知識產權代理有限公司
• 代理人: 張建綱

本發明屬于正電子發射計算機斷層(PET)顯像技術領域，具體涉及一種¹⁸F快速標記Cys?Annexin V的方法，以及獲得的¹⁸F?Al?NOTA?Cys?Annexin V在檢測細胞凋亡方面的應用，本發明所述的¹⁸F快速標記Cys?Annexin V的方法，首次采用¹⁸F?Al?NOTA?Maleimide標記Cys?Annexin V，該標記方法所用標記時間短，標記率高，并可實現¹⁸F定位標記Cys?Annexin V，且¹⁸F?Al?NOTA?Cys?Annexin V與PS保持良好的親和性，作為PET顯像劑可實現良好的顯像效果，具有較為理想的顯像特異性。

技術領域

本發明屬于PET顯像領域，具體涉及一種¹⁸F快速標記Cys-Annexin V 的方法及其應用。

背景技術

細胞凋亡(Apoptosis)又稱程序性細胞死亡(Programmed Cell Death， PCD)，是不同于壞死和意外死亡的、由基因調控的細胞主動性死亡過程。作為細胞生命周期中的重要組成部分，細胞凋亡的過程中伴隨著一系列的生物分子及細胞形態學的改變。其中，細胞膜脂質雙層中的磷脂酰絲氨酸(PS)由細胞膜內層翻轉至外層，進而暴露于細胞表面，是細胞凋亡早期事件，發生在凋亡細胞形態學的改變之前，也是凋亡級聯反應的初始事件。 PS的外翻作為凋亡細胞被吞噬細胞識別的標志，將會進一步引起胞漿的皺縮、染色質的濃集及核內DNA降解等現象。因此，外翻的PS作為凋亡檢測的靶點，具有較高的時效性，可早期檢測細胞凋亡。目前，在利用檢測外翻的PS來獲知細胞凋亡情況的技術中，正電子斷層顯像(positron emission tomography，PET)是常用的技術手段之一，其主要是利用¹¹C、¹³N、¹⁵O或¹⁸F等放射性核素標記的、可與PS特異性結合的物質作為顯像劑，通過顯像劑在代謝中聚集與分布的呈像，來獲知細胞凋亡的情況，從而達到診斷的目的。

在可與PS特異性結合的物質中，以Annexin V作為PET顯像劑的相關技術具有良好的應用前景。Annexin V(膜聯蛋白V，又稱Annexin A5 和AnxA5)是一種人體內源性蛋白，屬于Ca²⁺依賴性磷脂結合蛋白家族，含有319各氨基酸，包括70-80個氨基酸重復單元，分子量約為35kD。研究表明，Annexin V與PS特異性結合的親和力高達10^-9mol/L，其在被放射性核素標記、進而作為PET顯像劑進行體內細胞凋亡的顯像時，可實時監測體內凋亡的發生并且可實現細胞凋亡的活體無創顯像，因此，已成為監測活體細胞凋亡領域的研究熱點。在對Annexin V進行正電子核素標記的技術中，以¹⁸F標記Annexin V的¹⁸F-SFB-AnnexinV最為常見。但是，由于¹⁸F-SFB-Annexin V是通過功能基團(¹⁸F-SFB)連接Annexin V中賴氨酸殘基上的氨基，進而標記上放射性核素的，而一分子的Annexin V蛋白中含有21個賴氨酸殘基，因此，¹⁸F-SFB標記在Annexin V上的位置是不確定的，甚至標記上的個數也不確定。另外，Annexin V中的一些賴氨酸殘基處在Annexin V與PS結合的活性區域附近，¹⁸F-SFB與該處的賴氨酸殘基連接則會影響Annexin V與PS的親和性。這些均會導致¹⁸F-SFB-Annexin V在細胞凋亡顯像時特異性較低。