[發明專利]杏鮑菇原始母種的制作方法

有效

• 申請號: 201610080178.0
• 申請日: 2016-02-04
• 公開（公告）號: CN105613046B
• 公開（公告）日: 2018-07-27
• 發明（設計）人: 沈凡超;陽國秀;易恢滿;夏志蘭;姬建軍
• 申請（專利權）人: 湖南省宇秀生物科技有限公司
• 主分類號: A01G18/00
• 分類號: A01G18/00
• 代理公司: 中山市捷凱專利商標代理事務所(特殊普通合伙) 44327
• 代理人: 楊連華

1.一種杏鮑菇原始母種的制作方法，其特征在于，先是進行杏鮑菇原始母種的培養，再進行杏鮑菇原始母種的提純；包括以下步驟，

杏鮑菇原始母種的培養：

A、挑選種菇：從疏過蕾1-2天的育菇房，挑選多個六成熟，有本品種典型性狀，健壯、美觀、無病蟲害的菇子10-20個作為種菇，采摘的時候戴上無菌手套，采摘后放到無菌塑料袋里面，并封嚴實袋口；

B、準備用具：把種菇、經過檢測無菌的PDA培養皿、無菌水及全部操作用具滅菌后放入消過毒的超凈工作臺里面；

C、沖洗種菇：在無菌、正壓的情況下，戴上無菌手套用無菌水把種菇逐個沖洗干凈，分開放到超凈工作臺上，開紫外燈消毒30分鐘后，再開潔凈正壓風，把種菇表面的水分吹干、備用；

D、接種：戴上無菌手套，把杏鮑菇一分為二的切開，并在菌蓋和菌柄處用無菌手術刀切取菌種塊，用無菌的接種鉤，轉入無菌的PDA培養皿中心，每個種菇取兩塊，轉接到兩個無菌的培養皿之中；

E、封口裝袋：用封口膜把接完種的PDA培養皿邊緣封口并標記，再裝入密封的無菌袋；

F、恒溫培養：消毒培養箱，將裝袋后的PDA培養皿，放到恒溫培養箱里，溫度調到25±0.5℃，進行黑暗、避光無風或弱風培養4-8天；

G、篩選提純用種：培養期間，每天觀察培養皿的生長參數，對于1個種菇轉接的兩個培養皿，都表現最佳的生長參數，則選為提純的原始母種；

杏鮑菇原始母種提純的具體步驟如下：

H、制作PDA培養皿，皿內的培養基清晰、偏干、無雜質、整個培養基厚度均勻一致，控制在3.0±0.5mm；

I、切杏鮑菇菌絲尖端：將把長滿培養皿1/2的杏鮑菇菌種、全部操作器具放到經過紫外滅菌的超凈工作臺或生物安全柜里面，進行紫外或紫外加臭氧機避光滅菌20-40min；關閉紫外燈和臭氧機，開正壓風，用無菌刀片快速切杏鮑菇菌絲尖端1±0.5mm，一個培養皿切10-12個這種長度的尖端，切完后蓋上培養皿蓋子；

J、分離出帶有菌絲尖端的培養基塊：把切分過的菌種培養皿，用很薄的無菌刀片，分離出切好的菌絲尖端，同時要切下菌絲尖端所依附的培養基塊并分離出來，二者合稱為菌種塊；

K、分皿：把經過檢測無菌的培養皿、杏鮑菇菌種塊、全部操作器具在超凈工作臺或生物安全柜里面進行第二次紫外或紫外加臭氧機滅菌30-40min，戴上無菌手套，用接種鉤把分離出的菌種塊，鉤取移動到空白培養皿的中央，一個菌種塊放一個空白培養皿；

L、封口并標記：把轉接有菌種的培養皿封口并貼好標簽，放到密封的無菌塑料袋中；

M、培養：把培養皿放到26±1℃的恒溫培養箱里面，進行黑暗、避光、無風或弱風培養8-12天；

N、提純復壯：每天觀察記錄菌絲的各項生長指標，當菌絲長滿培養皿1/2-2/3的時候，選出優勢的2個培養皿作為下次提純復壯的出發菌種，按照上面方法，對菌絲尖端切取，重復上述H至N步驟3-8次；

O、選種：對經過提純，表現非常優良的菌絲進行鏡檢、病毒檢測、出菇試驗，對三個指標都表現達標、出菇試驗指標最優的菌種選作原始母種保藏。

2.根據權利要求1所述的杏鮑菇原始母種的制作方法，其特征在于，在“B、準備用具”步驟中的全部操作用具包括滅過菌的手術刀、接種鉤、無菌燒杯、酒精燈、酒精棉球、無菌手套、火機。

3.根據權利要求1所述的杏鮑菇原始母種的制作方法，其特征在于，所述“G、篩選提純用種”步驟中，所述生長參數包括培養皿的污染情況、菌種塊萌發的快慢、長滿培養皿時間、菌絲濃密度、菌絲光澤度、菌絲粗壯度、菌絲生長速度、菌絲邊緣整齊程度、菌絲伸展度、菌絲生長勢。

4.根據權利要求1所述的杏鮑菇原始母種的制作方法，其特征在于，“I、切杏鮑菇菌絲尖端”步驟中，全部操作器具包括酒精燈、體視 顯微鏡、滅過菌的手術刀、無菌手套、火機、酒精棉球；“K、分皿”步驟中全部操作器具包括酒精燈、酒精棉球、無菌手套、接種鉤。

5.根據權利要求1所述的杏鮑菇原始母種的制作方法，其特征在于，“N、提純復壯”步驟中，各項生長指標包括菌絲萌發的時間、菌絲長速、菌絲健壯度、菌絲光亮度、菌絲伸展度、菌絲粗細程度、菌絲邊緣整齊度，菌絲整體長勢。