[發明專利]諾如病毒的逆轉錄環介導等溫擴增檢測引物組、檢測方法和試劑盒

有效

• 申請號: 201610079851.9
• 申請日: 2016-02-04
• 公開（公告）號: CN105648111B
• 公開（公告）日: 2019-04-05
• 發明（設計）人: 羅鴻斌
• 申請（專利權）人: 東莞理工學院
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 廣州科粵專利商標代理有限公司 44001
• 代理人: 譚一兵

1.一種應用逆轉錄環介導等溫擴增檢測諾如病毒的檢測引物組，其特征在于，由下列引物組成：

上游外引物F3：5’- GATGGGTCCRCAGCCAAC -3’；

下游外引物B3：5’- TCARATCAGGGCCYAAGG -3’；

上游內引物FIP：5’- GCTACAGGYGCCGCRATAGCGGATCCCCCAGAGGTCAACAATGAGG -3’；

下游內引物BIP：5’- TACAAGCCCCTGGTGGAGAGTGGATCCCGCGCTCCAYAGTATYTCAC -3’；

所述的R為A/G，Y為C/T。

2.一種非疾病的診斷和治療目的的諾如病毒的檢測方法，其特征在于，對樣品進行病毒RNA提取，得到RNA樣品，然后通過逆轉錄環介導等溫擴增的方法用權利要求1所述的檢測引物組對RNA樣品進行擴增，確認是否存在有擴增產物。

3.根據權利要求2所述的檢測方法，其特征在于，所述的樣品為水或食品。

4.根據權利要求2所述的檢測方法，其特征在于，所述的通過逆轉錄環介導等溫擴增的方法用權利要求1所述的檢測引物組對RNA樣品進行擴增具體為：環介導等溫擴增體系為：10×buffer 2.5μL、10 mM dNTPs 3μL、10 μM FIP 2μL、10 μM BIP 0.5μL、10 μM F3 0.5μL、10 μM B3 2μL、25 mM MgSO₄ 2μL、0.4 M Betaine 2.5μL、Bst DNA聚合酶 1μL、AMV逆轉錄酶0.25μL、RNA樣品1μL，去離子水補足至25μL，反應條件為：64℃孵育40min。

5.根據權利要求2、3或4所述的檢測方法，其特征在于，所述的確認是否存在有擴增產物是在終止反應的反應管中加入1μL 10% SYBR Green Ⅰ顯色劑，10min后觀察結果，如果顏色為黃色，則樣品諾如病毒陰性，無諾如病毒，如果顏色為綠色，則樣品諾如病毒陽性，含有諾如病毒。

6.一種諾如病毒的檢測試劑盒，包括RNA提取試劑，逆轉錄環介導等溫擴增試劑和檢測引物組，其特征在于，所述的檢測引物組由下列引物組成：

上游外引物F3：5’- GATGGGTCCRCAGCCAAC -3’；

下游外引物B3：5’- TCARATCAGGGCCYAAGG -3’；

上游內引物FIP：5’- GCTACAGGYGCCGCRATAGCGGATCCCCCAGAGGTCAACAATGAGG -3’；

下游內引物BIP：5’- TACAAGCCCCTGGTGGAGAGTGGATCCCGCGCTCCAYAGTATYTCAC -3’；

所述的R為A/G，Y為C/T。