[發明專利]一種曲馬多檢測抗原及其制備方法

有效

• 申請號: 201610079188.2
• 申請日: 2016-02-04
• 公開（公告）號: CN105622748B
• 公開（公告）日: 2019-04-23
• 發明（設計）人: 凌世生
• 申請（專利權）人: 杭州旭科生物技術有限公司
• 主分類號: C07K14/765
• 分類號: C07K14/765;C07K14/77;C07K14/435;C07K1/02
• 代理公司: 浙江杭州金通專利事務所有限公司 33100
• 代理人: 黃素萍;徐關壽

1.一種曲馬多檢測抗原，其特征在于，其結構通式如下：

其中，m＝1，2，3，4，5。

2.根據權利要求1所述的曲馬多檢測抗原，其特征在于，大分子蛋白為牛血清白蛋白(BSA)、牛γ-球蛋白(BGG)或雞卵清蛋白(OVA)。

3.一種如權利要求1或2所述的曲馬多檢測抗原的制備方法，其特征在于，以曲馬多為原料，首先將曲馬多苯環上O位去甲基，然后通過溴丁酸乙酯在O-去甲曲馬多的O位上引出羧基，再脫去乙酯，通過羧基與大分子蛋白偶聯；其反應式如下：

反應式一：

反應式二：

其中，產物1：去甲曲馬多，

產物2：4-(3-(-((二甲基氨基)甲基)-羥基環己基)苯氧基)丁酸乙酯，

產物3：4-(3-(-((二甲基氨基)甲基)-羥基環己基)苯氧基)丁酸，

產物4：曲馬多抗原。

4.根據權利要求書3所述的制備方法，其特征在于，具體制備步驟如下：

(1)在氬氣保護下，將曲馬多和蛋氨酸溶解在甲磺酸中，室溫攪拌反應48-96h；反應完成后用NaOH調PH至11-12后用乙酸乙酯萃取，干燥，過濾，旋轉蒸發儀拉干，柱層析提純，得到產物1；其中，曲馬多和蛋氨酸摩爾比為1:2～1:6；

(2)將產物1溶于乙腈中，加入溴代烷烴酯和碳酸鉀，回流12～16小時；反應結束后過濾，干燥，旋轉蒸發儀拉干，得到產物2；其中，產物1和溴代烷烴酯摩爾比為1:1.2～1.5；

(3)將產物2溶解于甲醇中，加入4N NaOH，室溫攪拌8-16H，反應結束以后加入陽離子樹脂攪拌，檢測PH<7后過濾，旋轉蒸發儀拉干，柱層析純化得產物3；其中，甲醇和4N NaOH體積比為5:1；

(4)將產物3，1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)，N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)溶解于氮氮二甲基甲酰胺(DMF)中，室溫攪拌8H。然后滴入蛋白溶液中，攪拌過夜得到產物4；其中，產物3，DEC，NHS比例為1:1.2～1.5:1.2～1.5。