[發明專利]一種干細胞分化培養基及其應用

有效

• 申請號: 201610079144.X
• 申請日: 2016-02-04
• 公開（公告）號: CN105624114B
• 公開（公告）日: 2017-08-25
• 發明（設計）人: 陳運賢
• 申請（專利權）人: 廣東盈生力健康科技有限公司
• 主分類號: C12N5/0789
• 分類號: C12N5/0789
• 代理公司: 廣州市華學知識產權代理有限公司44245
• 代理人: 蘇運貞

1.一種干細胞分化培養基，其特征在于由如下成分組成：以α-MEM為基礎培養基，按比例添加如下成分：終濃度為體積百分比10％的FBS、終濃度為質量體積比0.5％的BSA、終濃度為5×10^-4mol/L的巰基乙醇、2mM的左旋-谷氨酰胺、終濃度為50ng/ml的干細胞因子、終濃度為25ng/ml的白介素3、終濃度為3U的促紅細胞生成素、終濃度為50μg/ml的維生素C、終濃度為10μg/ml的硫辛酸；

所述的干細胞為造血干/祖細胞。

2.權利要求1所述的干細胞分化培養基在對造血干/祖細胞分化潛能評估中的應用。

3.根據權利要求2所述的干細胞分化培養基在對造血干/祖細胞分化潛能評估中的應用，其特征在于：所述的造血干/祖細胞的個數為1個。

4.權利要求2或3所述的干細胞分化培養基在對造血干/祖細胞分化潛能評估中的應用，其特征在于包括如下步驟：

(1)將所述的干細胞分化培養基加入到細胞培養板中；

(2)通過流式分選儀，采用單細胞模式分選待分析細胞，往細胞培養板中的每個孔分選入一個待分析細胞；

(3)將含有單個細胞的細胞培養板轉入細胞培養箱，37℃、5％CO₂條件下培養10～14天；在培養期間，隔天更換新鮮的干細胞分化培養基，更新方法為移出一半舊的培養基，添加等體積新鮮的37℃預熱培養基；

(4)對步驟(3)培養增殖得到的細胞進行檢測，確定待分析細胞的分化潛能。

5.根據權利要求4所述的干細胞分化培養基在對造血干/祖細胞分化潛能評估中的應用，其特征在于：所述的細胞培養板為96孔細胞培養板。

6.根據權利要求4所述的干細胞分化培養基在對造血干/祖細胞分化潛能評估中的應用，其特征在于：步驟(4)中所述的檢測的方法包括細胞甩片、細胞染色形態學分析以及流式免疫表型分析。

7.根據權利要求4所述的干細胞分化培養基在對造血干/祖細胞分化潛能評估中的應用，其特征在于：所述的細胞染色形態學分析為吉姆薩染色分析。

8.根據權利要求4所述的干細胞分化培養基在對造血干/祖細胞分化潛能評估中的應用，其特征在于：所述的流式免疫表型分析中所用到的抗體包括識別髓系巨噬細胞的抗體、識別髓系粒細胞的抗體、識別髓系紅系細胞的抗體。