[發(fā)明專利]定量檢測辣椒素類物質的時間分辨熒光免疫層析試紙條、制備方法及其應用

有效

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• 申請日: 2016-02-04
• 公開（公告）號: CN105652005B
• 公開（公告）日: 2017-12-08
• 發(fā)明（設計）人: 李培武;楊青青;馬飛;張奇;張良曉;張文;李慧;丁曉霞;張兆威
• 申請（專利權）人: 中國農業(yè)科學院油料作物研究所
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577
• 代理公司: 湖北武漢永嘉專利代理有限公司42102
• 代理人: 喬宇

技術領域

本發(fā)明涉及定量檢測辣椒素類物質的時間分辨熒光免疫層析試紙條、制備方法及其應用。

背景技術

辣椒素類化合物是使辣椒具有辛辣刺激的主要化學物質，其成分主要包括辣椒素、二氫辣椒素、高二氫辣椒素、降二氫辣椒素、高辣椒素等化合物。其中辣椒素和二氫辣椒素約占辣椒素類物質總量的90％，并提供了約90％的辣熱感刺激。合成辣椒素具有與天然辣椒素類似的結構部和功能，且在價格和辣度上比天然辣椒素更占優(yōu)勢，也被廣泛應用于醫(yī)藥、殺蟲劑、防污涂料、軍事武器等領域。除了賦予食品辛辣味被用作調味品以外，辣椒素類物質還具有消炎鎮(zhèn)痛、抗病菌、抗腫瘤作用，能促進脂肪燃燒、降低血脂，抑制胃酸分泌、對胃黏膜損傷有保護作用等藥用價值。農藥領域，辣椒素類物質被認為是一種理想的無公害農藥，已有報道被應用于水果、蔬菜、谷物等作物上，免除了耐藥性及殘留檢驗。在輕工業(yè)領域可被用于高檔特種防污涂料，防止海洋水生物對船體的附著；用于電纜材料中以驅趕老鼠啃咬等。在醫(yī)藥領域，辣椒素類物質的藥物動力學研究離不開對動物組織及血清樣品中辣椒素類物質的檢測。此外還有報道指出，辣椒素類物質被可作為興奮劑的主要成分，被非法應用于各種競技賽事中，特別是賽馬活動中。因此，樣品中辣椒素類物質分析測定方法的研究對辣椒素類物質的規(guī)范使用及其安全評價意義重大。

現(xiàn)有的辣椒素類物質分析檢測方法主要是精密儀器分析法，主要包括高效液相色譜法、色譜-質譜聯(lián)用，這些方法靈敏度高，準確性好，但存在儀器昂貴，要求辣椒素類物質樣品純化程度高，樣品前處理過程繁瑣，耗時長，對實驗環(huán)境要求高等不足，難以實現(xiàn)快速檢測，并且，要測得辣椒素類物質總量，需要計算各種辣椒素類物質的含量之和。近年來迅速發(fā)展起來的免疫分析方法由于克服了上述方法的缺點，并具有特異性強、靈敏度高、分析容量大、方便快捷、成本低廉、適于現(xiàn)場批量檢測等優(yōu)點，被廣泛應用于醫(yī)學、農學等各個領域。

發(fā)明內容

本發(fā)明所要解決的問題是提供一種定量檢測辣椒素類物質的時間分辨熒光免疫層析試紙條、制備方法及其應用。

為解決上述技術問題，本發(fā)明采用的技術方案為：

定量檢測辣椒素類物質的時間分辨熒光免疫層析試紙條，其特征在于：它包括熒光試紙條、銪標記的抗辣椒素、二氫辣椒素、合成辣椒素通用單克隆抗體試劑和反應瓶，其中：所述熒光試紙條包括紙板，紙板的粘性面從上到下依次粘貼吸水墊、檢測墊和樣品墊，相鄰各墊在連接處交疊連接，所述的檢測墊以硝酸纖維素膜為基墊，硝酸纖維素膜上自上而下設置橫向質控線和檢測線，所述的質控線包被有兔抗鼠多克隆抗體，所述的檢測線上包被辣椒素類物質包被抗原；所述抗辣椒素、二氫辣椒素、合成辣椒素通用單克隆抗體由保藏編號為CCTCC NO.C201534的雜交瘤細胞株分泌產生。所述的雜交瘤細胞株YQQD8已于2015年4月23日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心(CCTCC)，保藏地址是，中國，武漢，武漢大學，保藏編號為CCTCC NO.C201534。

按上述方案，所述銪標記的抗辣椒素類物質單克隆抗體是按照以下方法制備得到的：將銪標記試劑活化后與抗辣椒素類物質單克隆抗體震蕩過夜，即得目標產物銪標記的抗辣椒素類物質單克隆抗體。

按上述方案，所述銪標記的抗辣椒素類物質單克隆抗體的制備方法：將銪標記試劑超聲分散在硼酸緩沖液中，加入EDC振蕩活化，離心，去除上清液，加入硼酸緩沖液振蕩混勻，超聲分散，然后加入抗辣椒素、二氫辣椒素、合成辣椒素通用單克隆抗體，其中銪標記試劑與抗辣椒素、二氫辣椒素、合成辣椒素通用單克隆抗體的質量比為1:(0.04-0.3)，混勻后，搖床震蕩過夜，離心去除未結合部分，然后加入OVA封閉銪標記試劑表面多余的結合位點，得目標產物銪標記的抗辣椒素類物質單克隆抗體。

按上述方案，所述的辣椒素類物質包被抗原的分子結構式如式Ⅱ所示：

Pr載體蛋白。

按上述方案，所述載體蛋白為牛血清白蛋白BSA、卵清白蛋白OVA或鑰孔血藍蛋白KLH，優(yōu)選為卵清白蛋白OVA。

按上述方案，所述熒光試紙條中的吸水墊長35～45mm，寬3～5mm；檢測墊長23～28mm，寬3～5mm；樣品墊長10～15mm，寬3～5mm，相鄰各墊的交疊長度為1～3mm；所述熒光試紙條中檢測墊上的檢測線與硝酸纖維素膜上沿的間距為5～10mm，質控線和檢測線的間距為5～10mm。