[發(fā)明專利]定量檢測(cè)辣椒素類物質(zhì)的時(shí)間分辨熒光免疫層析試紙條、制備方法及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610078988.2
• 申請(qǐng)日: 2016-02-04
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN105652005B
• 公開(kāi)（公告）日: 2017-12-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李培武;楊青青;馬飛;張奇;張良曉;張文;李慧;丁曉霞;張兆威
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院油料作物研究所
• 主分類號(hào): G01N33/577
• 分類號(hào): G01N33/577
• 代理公司: 湖北武漢永嘉專利代理有限公司42102
• 代理人: 喬宇

1.定量檢測(cè)辣椒素類物質(zhì)的時(shí)間分辨熒光免疫層析試紙條組件，其特征在于：它包括熒光試紙條、銪標(biāo)記的抗辣椒素、二氫辣椒素、合成辣椒素通用單克隆抗體試劑和樣品反應(yīng)瓶，其中：所述熒光試紙條包括紙板，紙板的粘性面從上到下依次粘貼吸水墊、檢測(cè)墊和樣品墊，相鄰各墊在連接處交疊連接，所述的檢測(cè)墊以硝酸纖維素膜為基墊，硝酸纖維素膜上自上而下設(shè)置橫向質(zhì)控線和檢測(cè)線，所述的質(zhì)控線包被有兔抗鼠多克隆抗體，所述的檢測(cè)線上包被辣椒素類物質(zhì)包被抗原；所述抗辣椒素、二氫辣椒素、合成辣椒素通用單克隆抗體由保藏編號(hào)為CCTCC NO.C201534的雜交瘤細(xì)胞株分泌產(chǎn)生。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的定量檢測(cè)辣椒素類物質(zhì)的時(shí)間分辨熒光免疫層析試紙條組件，其特征在于：所述銪標(biāo)記的抗辣椒素、二氫辣椒素、合成辣椒素通用單克隆抗體是按照以下方法制備得到的：將銪標(biāo)記試劑活化后與抗辣椒素、二氫辣椒素、合成辣椒素通用單克隆抗體混合，震蕩過(guò)夜，即得目標(biāo)產(chǎn)物銪標(biāo)記的抗辣椒素、二氫辣椒素、合成辣椒素通用單克隆抗體。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的定量檢測(cè)辣椒素類物質(zhì)的時(shí)間分辨熒光免疫層析試紙條組件，其特征在于：所述銪標(biāo)記的抗辣椒素、二氫辣椒素、合成辣椒素通用單克隆抗體的制備方法：將銪標(biāo)記試劑超聲分散在硼酸緩沖液中，加入EDC振蕩活化，離心，去除上清液，加入硼酸緩沖液振蕩混勻，超聲分散，然后加入抗辣椒素、二氫辣椒素、合成辣椒素通用單克隆抗體，混勻，搖床震蕩過(guò)夜，離心去除未結(jié)合部分，然后加入OVA封閉銪標(biāo)記試劑表面多余的結(jié)合位點(diǎn)，得目標(biāo)產(chǎn)物銪標(biāo)記的抗辣椒素、二氫辣椒素、合成辣椒素通用單克隆抗體。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的定量檢測(cè)辣椒素類物質(zhì)的時(shí)間分辨熒光免疫層析試紙條組件，其特征在于：所述的辣椒素類物質(zhì)包被抗原的分子結(jié)構(gòu)式如式Ⅱ所示：

Pr載體蛋白，所述載體蛋白為牛血清白蛋白BSA、卵清白蛋白OVA或鑰孔血藍(lán)蛋白KLH。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的定量檢測(cè)辣椒素類物質(zhì)的時(shí)間分辨熒光免疫層析試紙條組件，其特征在于：所述定量檢測(cè)辣椒素類物質(zhì)的時(shí)間分辨熒光免疫層析試紙條組件還包括樣品稀釋液和樣品稀釋液吸管，所述的樣品稀釋液為質(zhì)量體積分?jǐn)?shù)為0.01～0.30％的吐溫-20，質(zhì)量體積分?jǐn)?shù)為0.5～1.5％蔗糖和質(zhì)量體積分?jǐn)?shù)為0.1～1％卵清蛋白的水溶液；

所述熒光試紙條中的吸水墊長(zhǎng)35～45mm，寬3～5mm；檢測(cè)墊長(zhǎng)23～28mm，寬3～5mm；樣品墊長(zhǎng)10～15mm，寬3～5mm，相鄰各墊的交疊長(zhǎng)度為1～3mm；所述熒光試紙條中檢測(cè)墊上的檢測(cè)線與硝酸纖維素膜上沿的間距為5～10mm，質(zhì)控線和檢測(cè)線的間距為5～10mm。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的定量檢測(cè)辣椒素類物質(zhì)的時(shí)間分辨熒光免疫層析試紙條組件，其特征在于：所述熒光試紙條中檢測(cè)墊上每厘米檢測(cè)線所需的辣椒素類物質(zhì)包被抗原包被量為0.125～0.6μg；每厘米質(zhì)控線所需的兔抗鼠多克隆抗體的包被量為0.1～0.6μg；所述樣品反應(yīng)瓶中銪標(biāo)記的抗辣椒素、二氫辣椒素、合成辣椒素通用單克隆抗體的含量為0.31～0.53μg。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的定量檢測(cè)辣椒素類物質(zhì)的時(shí)間分辨熒光免疫層析試紙條組件，其特征在于：所述的熒光試紙條的制備步驟如下：

(1)將吸水紙剪裁得吸水墊；

(2)檢測(cè)墊的制備：

將辣椒素類物質(zhì)包被抗原配制成濃度為0.2～1.0mg/mL的包被液，于距硝酸纖維素膜上沿5～10mm的位置，用線噴方式將其橫向包被于硝酸纖維素膜上，得到檢測(cè)線，每厘米檢測(cè)線所需辣椒素類物質(zhì)包被抗原的包被量為0.125～0.6μg，然后于37℃條件下干燥30～60分鐘；

將兔抗鼠多克隆抗體配成濃度為0.15～1.0mg/mL的包被液，于距檢測(cè)線5～10mm的位置，用線噴方式將其橫向包被于硝酸纖維素膜上，得質(zhì)控線，每厘米質(zhì)控線所需的兔抗鼠多克隆抗體的包被量為0.1～0.6μg，然后于37℃條件下干燥30～60分鐘；

(3)樣品墊的制備：

將玻璃纖維膜放入封閉液中浸濕，取出，于37℃條件下干燥6～12小時(shí)，得樣品墊，然后置干燥器中室溫保存；

(4)熒光試紙條的組裝：

在紙板的粘性面從上到下依次粘貼吸水墊、檢測(cè)墊、樣品墊，相鄰各墊在連接處交疊連接，交疊長(zhǎng)度為1～3mm，即得熒光試紙條。