[發明專利]一種古代羊毛織品間接競爭法檢測試紙的制備方法

在審

• 申請號: 201610078943.5
• 申請日: 2016-02-04
• 公開（公告）號: CN105717291A
• 公開（公告）日: 2016-06-29
• 發明（設計）人: 游秋實;王秉;劉意;劉楊
• 申請（專利權）人: 浙江理工大學
• 主分類號: G01N33/558
• 分類號: G01N33/558
• 代理公司: 杭州杭誠專利事務所有限公司 33109
• 代理人: 尉偉敏

1.一種古代羊毛織品間接競爭法檢測試紙的制備方法，其特征在于步驟如下：

A)熒光標記兔抗角蛋白抗體的制備：向每2.5-3.5mL的PBS緩沖液中依次加入0.14-0.16mg的熒光微球、2.6-2.8μL的現配的濃度為4-6mg/mL的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺溶液和8-12μL的濃度為0.4-0.6mg/mL的兔抗角蛋白抗體溶液，得到A混合液，將所述A混合液在室溫下攪拌1.5-2.5h，用0.5-1.5wt%的牛血清蛋白溶液封閉25-35min后在8000-10000r/min、4℃條件下離心處理8-12min，移除上清液，將沉淀加入到體積為兔抗角蛋白抗體溶液30倍的PBS緩沖液中復溶、混勻，制得熒光標記兔抗角蛋白抗體溶液，將所述熒光標記兔抗角蛋白抗體溶液保存備用；

B)試紙條的組裝：用噴膜機將5-20體積份的羊毛角蛋白稀釋液和5-20體積份的山羊抗兔抗體稀釋液分別噴在硝酸纖維素膜的檢測線和質控線上，在36-38℃下烘干備用；將5-20體積份的熒光標記兔抗角蛋白抗體溶液稀釋10-20倍后包被在熒光結合墊上，在36-38℃下烘干備用；將樣品墊、熒光結合墊、硝酸纖維素膜和吸水墊依次組裝在PVC底板上，并切割成條狀，制得檢測試紙，將所述檢測試紙放入帶干燥劑的鋁箔袋中密封儲存。

2.如權利要求1所述的一種古代羊毛織品間接競爭法檢測試紙的制備方法，其特征在于，步驟A）中所述熒光微球為聚苯乙烯熒光微球，粒徑為100-110nm，激發波長為365nm，發射波長為610nm。

3.如權利要求1所述的一種古代羊毛織品間接競爭法檢測試紙的制備方法，其特征在于，所述PBS緩沖液的濃度為0.02mol/L，pH為5.5。

4.如權利要求1或3所述的一種古代羊毛織品間接競爭法檢測試紙的制備方法，其特征在于，步驟A）中所述牛血清蛋白溶液的用量為A混合液體積的1-1.2倍。

5.如權利要求1所述的一種古代羊毛織品間接競爭法檢測試紙的制備方法，其特征在于，步驟B)中所述硝酸纖維素膜的規格為長2.5cm，寬4mm。

6.如權利要求1或5所述的一種古代羊毛織品間接競爭法檢測試紙的制備方法，其特征在于，所述檢測試紙的寬度為4mm。

7.如權利要求1所述的一種古代羊毛織品間接競爭法檢測試紙的制備方法，其特征在于，所述羊毛角蛋白稀釋液的制備方法為：將羊毛角蛋白用Tris-HCl溶液稀釋至濃度為0.5-4mg/mL。

8.如權利要求7所述的一種古代羊毛織品間接競爭法檢測試紙的制備方法，其特征在于，所述山羊抗兔抗體稀釋液的制備方法為：將濃度為1mg/mL的山羊抗兔抗體溶液用Tris-HCl溶液稀釋至100-400倍。

9.如權利要求8所述的一種古代羊毛織品間接競爭法檢測試紙的制備方法，其特征在于，所述熒光標記兔抗角蛋白抗體溶液稀釋所用的稀釋溶液包括0.15wt%的吐溫-20，1%的牛血清蛋白、5%的蔗糖和余量的Tris-HCl溶液。

10.如權利要求7、8、9之一所述的一種古代羊毛織品間接競爭法檢測試紙的制備方法，其特征在于，步驟B)中所述Tris-HCl溶液的pH為8.2。