[發明專利]4?松油醇型互葉白千層組培繼代芽的開放式生根培養方法

有效

• 申請號: 201610078473.2
• 申請日: 2016-02-04
• 公開（公告）號: CN105706927B
• 公開（公告）日: 2018-03-13
• 發明（設計）人: 陳博雯;劉海龍;肖玉菲;覃子海;張燁;張曉寧
• 申請（專利權）人: 廣西壯族自治區林業科學研究院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 廣西南寧匯博專利代理有限公司45114
• 代理人: 鄒超賢

技術領域

本發明屬于植物無性快繁技術領域，涉及組培苗的生根方法，尤其是涉及一種4-松油醇型互葉白千層組培苗的開放式生根培養方法。

背景技術

互葉白千層 (Melaleuca ahemifolia)是桃金娘科白千層屬的一種香料植物，90年代初從澳大利亞引種至我國南方，目前在廣西、廣東、云南和福建等省份都有種植。互葉白千層的莖和葉經過水蒸氣蒸餾而得的精油也稱茶樹油，既是天然香料，又具有強力殺菌作用，經濟價值較高。

互葉白千層的種子多為敗育，發芽率低，且種間差異大，所以目前互葉白千層的繁育主要采用扦插和組培兩種，其中組培繁育的高效、快速及穩定性使其更具備市場競爭力。

互葉白千層精油成分中，最主要的有效成份為4-松油醇，經研究人員多年選育，已選育出多個松油醇含量較高的4-松油醇型互葉白千層優良品種，但較高的松油醇成分在組培繁育時表現出對根系萌發的負面影響，使現有的組培技術生根率有限。本發明摒棄了現有的互葉白千層組培技術中廣泛采用的MS及其系列改良培養基，而是在WPM和B5培養基的基礎上，通過優化調整培養基成分，有效降低了松油醇對生根率的影響，并且通過添加適宜的抑菌劑，建立的穩定、高效的4-松油醇型互葉白千層組培繼代芽的開放式生根培養方法，為4-松油醇型互葉白千層良種組培快繁助力。

發明內容

本發明的目的旨在提供一種4-松油醇型互葉白千層組培繼代芽的開放式生根培養方法，從而為其商業化快速繁育提供技術條件。

本發明的技術方案是：

通過優化調整培養基的成分及比例，篩選得到可以促進4-松油醇型互葉白千層組培繼代芽生根的培養基配方，添加適宜的抑菌劑，再輔以適宜的溫度和光照，建立4-松油醇型互葉白千層組培繼代芽的開放式生根培養方法。

本發明是這樣實現的：

一種4-松油醇型互葉白千層組培繼代芽的開放式生根培養方法，包括繼代芽壯苗培養、生根培養基配制、生根培養、煉苗、移栽5個工序，其操作步驟如下：

（1）繼代芽壯苗培養：采用常規繼代培養基進行繼代芽的增殖培養；當繼代芽單芽長度達到1.0cm時，增加光照促使單芽老練；

（2）生根培養基配制：培養基配方采用2/5～4/5改良WPM培養基或1/5～3/5改良B5培養基附加IBA0.05～1.5mg/L、ABT6號0.05～1.5mg/L、蔗糖15000mg/L、瓊脂6.0g/L，在潔凈的環境中，將培養基按照配方配制好后，持續煮沸20分鐘，調節pH值至5.8～6.0，加入抑菌劑后混勻，分裝在一次性聚乙烯塑料杯中，每杯用保鮮膜覆蓋并用橡膠圈固定，待降溫凝結后使用；

（3）生根培養：將步驟（1）繼代芽繼續培養使芽伸長，選擇長度1.0cm以上，并且綠色明顯加深，稍木質化的單芽在超凈臺中剪下，并接種于步驟（2）中配制好的生根培養基中生根培養；

（4）煉苗：當步驟（3）單芽生根培養至根系長度達到1.5cm后，將瓶苗移至室外具有遮陰裝置的大棚中進行煉苗，遮陰度要求為75～85 %，煉苗10～15天；

（5）移栽：將步驟（4）煉苗后的小苗從杯中取出，清水洗去根系附著的培養基，移栽至消毒處理后淋透清水的紅心土或輕基質營養杯中，用塑料薄膜和遮陰網進行保濕遮陰2～3天后，按常規方法管護，當苗高30cm以上、無病蟲害的4-松油醇型互葉白千層組培苗木可出圃造林。

以上步驟（2）中所述的潔凈環境，是指配制培養基專用實驗室，實驗室內的實驗臺面及周圍操作空間，用75%酒精噴霧消毒；分裝過程中的其他用具均用0.3%的新潔爾滅浸泡消毒15分鐘，聚乙烯塑料杯為一次性使用。

以上步驟（2）中所述的抑菌劑成分為：頭孢霉素50～150mg/L，50％的可濕性粉劑多菌靈4～10%，4-松油醇型互葉白千層枝葉浸出液1～5%。

以上所述的4-松油醇型互葉白千層枝葉浸出液的制備方法為：取一年生4-松油醇型互葉白千層枝葉250g，剪短至5cm小段后加入試劑瓶中，再加入75%的酒精1L并密封，置于4℃冰箱中浸泡48小時，過濾獲得浸出液。