[發明專利]4?松油醇型互葉白千層組培繼代芽的開放式生根培養方法

有效

• 申請號: 201610078473.2
• 申請日: 2016-02-04
• 公開（公告）號: CN105706927B
• 公開（公告）日: 2018-03-13
• 發明（設計）人: 陳博雯;劉海龍;肖玉菲;覃子海;張燁;張曉寧
• 申請（專利權）人: 廣西壯族自治區林業科學研究院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 廣西南寧匯博專利代理有限公司45114
• 代理人: 鄒超賢

1.一種4-松油醇型互葉白千層組培繼代芽的開放式生根培養方法，其特征在于：包括繼代芽壯苗培養、生根培養基配制、生根培養、煉苗、移栽5個工序，其操作步驟如下：

（1）繼代芽壯苗培養：采用常規繼代培養基進行繼代芽的增殖培養；當繼代芽單芽長度達到1.0cm時，增加光照促使單芽老練；

（2）生根培養基配制：培養基配方采用2/5～4/5改良WPM培養基或1/5～3/5改良B5培養基附加IBA 0.05～1.5 mg/L、ABT6號 0.05～1.5 mg/L、蔗糖15000 mg/L、瓊脂6.0g/L，在潔凈的環境中，將培養基按照配方配制好后，持續煮沸20分鐘，調節pH值至5.8～6.0，加入抑菌劑后混勻，分裝在一次性聚乙烯塑料杯中，每杯用保鮮膜覆蓋并用橡膠圈固定，待降溫凝結后使用；

（3）生根培養：將步驟（1）繼代芽繼續培養使芽伸長，選擇長度1.0cm以上，并且綠色明顯加深，稍木質化的單芽在超凈臺中剪下，并接種于步驟（2）中配制好的生根培養基中生根培養；

（4）煉苗：當步驟（3）單芽生根培養至根系長度達到1.5cm后，將瓶苗移至室外具有遮陰裝置的大棚中進行煉苗，遮陰度要求為75～85 %，煉苗10～15天；

（5）移栽：將步驟（4）煉苗后的小苗從杯中取出，清水洗去根系附著的培養基，移栽至消毒處理后淋透清水的紅心土或輕基質營養杯中，用塑料薄膜和遮陰網進行保濕遮陰2～3天后，按常規方法管護，當苗高30cm以上、無病蟲害的4-松油醇型互葉白千層組培苗木出圃造林；

步驟（2）中所述的抑菌劑成分為：頭孢霉素50～150mg/L， 50％的可濕性粉劑多菌靈4～10%，4-松油醇型互葉白千層枝葉浸出液1～5%；所述的4-松油醇型互葉白千層枝葉浸出液的制備方法為：取一年生4-松油醇型互葉白千層枝葉250g，剪短至5cm小段后加入試劑瓶中，再加入75%的酒精1L并密封，置于4℃冰箱中浸泡48小時，過濾獲得浸出液；

步驟（3）所述生根培養的條件為：溫度（28～30）±2℃，光照1500～3000 lx，每日光照12 ～16小時；

所述改良WPM培養基的組分和體積重量比為：NH₄NO₃330 mg/L、CaCl₂·2H₂O96 mg/L、MgSO₄·7H₂O370 mg/L、KH₂PO₄170 mg/L、Ca(NO₃)₂·4H₂O180 mg/L、KI 0.83mg/L、MnSO₄·H₂O22.4 mg/L、ZnSO₄·7H₂O 8.6 mg/L、Na₂MoO₄·2H₂O 0.25mg/L、CuSO₄·5H₂O0.025 mg/L、Na₂·EDTA37.3 mg/L、FeSO₄·7H₂O 27.8mg/L、肌醇200mg/L、煙酸0.5mg/L、鹽酸吡哆醇0.5 mg/L、鹽酸硫胺素1.0 mg/L、甘氨酸2.0 mg/L；

所述改良B5培養基的組分和體積重量比為：KNO₃ 2500 mg/L、CaCl₂?2H₂O150 mg/L、MgSO₄?7H₂O250mg/L、(NH₄)₂SO₄134mg/L、NaH₂PO₄?H₂O150mg/L、Ca(NO₃)₂?4H₂O 200mg/L、KI0.83mg/L、H₃BO₃3.0mg/L、MnSO₄?H₂O10mg/L、ZnSO₄?7H₂O2.0mg/L、Na₂MoO₄?2H₂O0.25mg/L、CuSO₄?5H₂O0.025mg/L、Na₂?EDTA 37.3mg/L、FeSO₄?7H₂O27.8 mg/L、肌醇200mg/L、煙酸0.5mg/L、鹽酸吡哆醇0.5mg/L、鹽酸硫胺素1.0mg/L、甘氨酸 2.0 mg/L。

2.根據權利要求1所述的4-松油醇型互葉白千層組培繼代芽的開放式生根培養方法，其特征在于：步驟（2）中所述的潔凈的環境，是指配制培養基專用實驗室，實驗室內的實驗臺面及周圍操作空間，用75%酒精噴霧消毒；分裝過程中的其他用具均用0.3%的新潔爾滅浸泡消毒15分鐘，聚乙烯塑料杯為一次性使用。