[發明專利]一種檢測核糖核酸酶的方法及其試劑盒

有效

• 申請號: 201610077918.5
• 申請日: 2016-02-03
• 公開（公告）號: CN105567841B
• 公開（公告）日: 2019-02-12
• 發明（設計）人: 張必良;劉靄珊;曹亮;克雷格·梅洛
• 申請（專利權）人: 廣州市銳博生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6816
• 分類號: C12Q1/6816;C12Q1/44
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;白艷

本發明公開了一種檢測核糖核酸酶的方法及其試劑盒。本發明提供了一種檢測待測樣本中核糖核酸酶的方法，包括如下步驟：1)設計合成RNA探針；2)將待測樣本和含有所述RNA探針的反應體系混勻，得到反應液；3)檢測所述反應液熒光強度，根據熒光強度確定待測樣本是否含有核糖核酸酶。本發明的方法優勢體現在：1)靈敏度高(0.1pg/ml RNase A，比Ambion高100倍)；2)可實時觀測；3)可高通量檢測：能同時對大量樣本進行檢測；反應體積小，成本低，簡單快速(1小時左右)，適宜實驗室的常規質控；4)廣譜性：可檢測不同樣本中，不同核糖核酸酶的含量和含量；5)安全：不使用任何有害化合物。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，尤其涉及一種檢測核糖核酸酶的方法及其試劑盒。

背景技術

核糖核酸酶(Ribonuclease，RNase)能將RNA底物水解成小分子核酸。大部分核糖核酸酶活性需要二價陽離子(如Ca²⁺、Mg²⁺等)。其中RNase A是一種有廣泛應用的核酸內切酶。RNase A對RNA有水解作用，但對DNA則不起作用。

RNase A在嘧啶核苷酸殘基C和U的3′端處高效且專一地催化RNA鏈骨架上的磷酸二酯鍵的裂開，形成具有2′，3′-環磷酸衍生物的寡聚核苷酸。

RNase是實驗室普遍存在的環境污染物，對RNase活性的監測是一個常規質量控制(QC)步驟。另一方面，對RNase的檢測方法還可應用于疾病診斷中，如癌癥檢測。1970年，Reddi首次證實胰腺癌患者血清RNase異常升高(Reddi KK，Holland JF.Elevatedserumribonuclease in patients with pancreatic cancer.Proc Natl Acad SciUSA.1976，73(7)：2308-10)，血清RNase濃度檢測可用于胰腺癌診斷。

測量RNase活性的方法有多種，如放射性同位素法(Egly JM andKempfJ.Detection and estimation of very low ribonuclease activities inbiological fluids.FEBS Letters，1976，63：250-254)、分光光度法(Wagner AP，Iordachel MC and Wagner LP.A simple spectrophotometric method for themeasurement of ribonuclease activity in biological fluids.J.Biochem.Biophys.Methods，1983，8：291-297)和熒光淬滅法(James DA and Woolley GA.Afluorescence-based assay for ribonuclease aactivity.Anal.Biochem.，1998，264：26-33)，電化學法(Takenaka,S.S.a.S.(2014).Highly Sensitive Nuclease Assays Based onChemically Modified DNA or RNA.Sensors)等。其中以人工合成的寡聚核糖核酸分子為底物的RNA酶檢測技術準確性較高(Witmer MR，Falcomer CM，Weiner MP，Kay MS，BegleyTP，Ganem B andScheraga HA.U-3′-BCIP：a chromogenic substrate for the detectionof RNase A inrecombinant DNA expression systems.Nucleic Acids Res.，1991，19：1-4)。