[發(fā)明專利]一種檢測(cè)核糖核酸酶的方法及其試劑盒

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610077918.5
• 申請(qǐng)日: 2016-02-03
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN105567841B
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-02-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張必良;劉靄珊;曹亮;克雷格·梅洛
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣州市銳博生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/6816
• 分類號(hào): C12Q1/6816;C12Q1/44
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 關(guān)暢;白艷

1.一種檢測(cè)待測(cè)樣本中核糖核酸酶的非疾病診斷和治療的方法，包括如下步驟：

1）設(shè)計(jì)合成RNA探針，所述RNA探針如下SEQ1- SEQ9任一所示；

SEQ1：FAM-CGUA-TAMA

SEQ2：FAM-AUGCA-TAMA

SEQ3：TAMA-AUGCA-FAM

SEQ4：HEX-AGCUGA-BQH

SEQ5：HEX-AGCUGA-TAMA

SEQ6：CY3-GCUAUGCAU-Dabcy

SEQ7：CY5-CGAUGCAUGC-Dabcy1

SEQ8：CY5-AGCUAC-Dabcy1

SEQ9：FAM-CUGCAU-BQH

其中，A、U、G、C分別代表腺嘌呤核苷酸、尿嘧啶核苷酸、鳥(niǎo)嘌呤核苷酸、胞嘧啶核苷酸；A、C、U分別代表2-氧甲基腺嘌呤核苷酸，2-氧甲基胞嘧啶核苷酸，2-氧甲基尿嘧啶核苷酸；FAM（6-carboxyfluorescein）為6-羧基熒光素基團(tuán)，HEX（5-hexachlorofluorescein）為5-六氯熒光素基團(tuán)，TAMRA（5-caboxytetramethylrhodamine）為5-羧基四甲基羅丹明，Dabcy1（4-(4-dimethylaminophenylazo)Benzoic acid）為4-(4-二甲基氨基苯偶氮基)苯甲酸基團(tuán)， CY3和CY5為三氫-吲哚菁型染料，屬于花菁染料；

2）將待測(cè)樣本和含有所述RNA探針的反應(yīng)體系混勻，得到反應(yīng)液；

3）檢測(cè)所述反應(yīng)液熒光強(qiáng)度，根據(jù)熒光強(qiáng)度確定待測(cè)樣本是否含有核糖核酸酶。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：步驟2）中，所述含有RNA探針的反應(yīng)體系中RNA探針的濃度為0.01pmol/ul-1pmol/ul。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于：所述含有RNA探針的反應(yīng)體系由RNA探針、10×反應(yīng)緩沖液和水組成；

所述10×反應(yīng)緩沖液由0-5M NaCl、0-5M KCl、20mM-1M Tris、10-100mM MgCl₂和水組成，且NaCl和 KCl的濃度均不為0。

4.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一所述的方法，其特征在于：所述檢測(cè)反應(yīng)液熒光強(qiáng)度的方法為實(shí)時(shí)定量PCR、電泳法、熒光法、HPLC法或電化學(xué)方法。

5.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一所述的方法，其特征在于：所述核糖核酸酶為RNase I、RNaseA或RNase T1。

6.一種檢測(cè)待測(cè)樣本中核糖核酸酶的試劑盒，包括權(quán)利要求1所述方法中的RNA探針。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒還包括10×反應(yīng)緩沖液；

所述10×反應(yīng)緩沖液由0-5M NaCl、0-5M KCl、20mM-1M Tris、10-100mM MgCl₂和水組成，且NaCl和 KCl的濃度均不為0。

8.權(quán)利要求1-5任一所述的方法或權(quán)利要求6或7所述的試劑盒在檢測(cè)待測(cè)樣本中核糖核酸酶含量或相對(duì)含量的非疾病診斷和治療中的應(yīng)用。

9.權(quán)利要求1-5任一所述的方法或權(quán)利要求6或7所述的試劑盒在比較兩個(gè)或多個(gè)待測(cè)樣本中核糖核酸酶含量或相對(duì)含量的非疾病診斷和治療中的應(yīng)用。