[發明專利]檢測脫氧核糖核酸酶的DNA探針、試劑盒和方法

在審

• 申請號: 201610076852.8
• 申請日: 2016-02-03
• 公開（公告）號: CN105648062A
• 公開（公告）日: 2016-06-08
• 發明（設計）人: 張必良;劉靄珊;曹亮;克雷格·梅洛
• 申請（專利權）人: 廣州市銳博生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/34;C12N15/11
• 代理公司: 廣州華進聯合專利商標代理有限公司 44224
• 代理人: 萬志香;胡杰

1.一種DNA探針，其特征在于,其包含有一個莖環結構，且2個末端或 內部分別連接有能量供體基團和能量受體基團，能量供體基團和能量受體基 團之間能進行能量轉移,所述DNA探針的堿基長度為15-50個核苷酸，且包 含一個能被DNase切割的位點，被降解后的探針的能量供體基團和能量受 體基團在不同的探針片段上；

所述莖環結構中，其莖結構包括分別位于探針兩端的5～15bp的回文互補序 列，其環結構包括長度為5～20nt的核苷酸序列，探針退火后形成莖環結構， 兩個回文互補部分Tm值大于35℃。

2.根據權利要求1所述的DNA探針，其特征在于，所述莖環結構中，其 莖結構包括至少一個T，其環結構包括至少一個1個A、1個C、1個T和1 個G。

3.根據權利要求1所述的DNA探針，其特征在于,所述能量供體基團為 熒光基團，所述能量受體基團為其對應的熒光淬滅基團。

4.根據權利要求3所述的DNA探針，其特征在于,所述熒光基團和熒光 淬滅基團選自FAM、TAMRA、HEX、CY染料、BQH、Dabcy1。

5.根據權利要求1所述的DNA探針，其特征在于,所述DNA探針選自 如SEQIDNO.1—SEQIDNO.8所示中的至少一條。

6.根據權利要求1-5任一項所述的DNA探針，其特征在于,所述DNA 探針至少包括一個具脫氧核糖核酸酶抗性和/或提高酶解特異性的修飾的核 糖核苷酸。

7.根據權利要求6所述的DNA探針，其特征在于,所述DNA探針的末 端的核糖核苷酸為硫代磷酸核糖核苷酸。

8.一種脫氧核糖核酸酶的檢測試劑盒，其特征在于,包括有權利要求1-7 任一項所述的DNA探針。

9.一種脫氧核糖核酸酶的檢測方法，其特征在于,該方法包括以下步驟

1)制備如權利要求1-7任一項所述DNA探針作為底物；

2)將待檢測樣本與步驟1)中所述底物接觸；

3)PCR熒光定量檢測，檢測步驟2)接觸反應后的底物的熒光強度。

10.根據權利要求9所述的脫氧核糖核酸酶的檢測方法，其特征在于,其步 驟還包括在PCR熒光定量檢測之前在反應體系中加入緩沖液，所述緩沖液成 分包括0.01～5MNaCl,0.01～5MKCl,50mM～1MTris-HCl,10～100mMMgCl₂， 緩沖液的pH值6.5～9.0。