[發(fā)明專利]一種B型流感嗜血桿菌莢膜多糖的制備方法及聯(lián)合疫苗

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610076833.5
• 申請日: 2016-02-03
• 公開（公告）號: CN105646726A
• 公開（公告）日: 2016-06-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 侯文禮
• 申請（專利權(quán)）人: 成都康華生物制品有限公司
• 主分類號: C08B37/00
• 分類號: C08B37/00;C12P19/04;A61K39/116;A61K39/10;A61K39/08;A61K39/05;A61K39/102;A61P31/04;C12R1/02
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及，具體涉及到一種B型流感嗜血桿菌莢膜多糖的制備方法及聯(lián) 合疫苗。

背景技術(shù)

流感嗜血桿菌是常見的致病菌，僅對人類致病，分帶莢膜菌株和不帶莢 膜菌株。莢膜菌株據(jù)莢膜多糖的特異性抗原不同分6個(gè)血清型(a-f)，其中b 型抗原毒力最大，是小兒敗血癥、腦膜炎和肺炎的主要致病菌。Hib莢膜由 脂多糖和莢膜多糖組成，主要成分是核糖基磷酸醇磷酸鹽 (polyriboylribitolphosphate，PRP)，它的結(jié)構(gòu)包括一個(gè)核糖、一個(gè)核糖醇以 及一個(gè)磷酸堿。

Hib通過飛沫傳播，主要感染5歲以下兒童。新生兒通過胎盤傳遞血清 殺菌抗體，從母體獲得的。以蛋白質(zhì)為載體的結(jié)合疫苗接種兒童，產(chǎn)生的抗 體比單獨(dú)用莢膜多糖疫苗高得多、且能維持較長時(shí)間，這些疫苗的基礎(chǔ)是通 過PRP多糖與有免疫原性的蛋白載體以共價(jià)鍵結(jié)合，使半抗原變成完全抗 原，從而使非胸腺依賴抗原(Ti-Ag)轉(zhuǎn)變成胸腺依賴抗原(Td-Ag)，促進(jìn)T細(xì) 胞對B細(xì)胞的作用。Ti-Ag僅能激發(fā)體液免疫，而Td-Ag不僅能激發(fā)體液免 疫，而且還能引起細(xì)胞免疫，同時(shí)產(chǎn)生免疫記憶，通過抗原的轉(zhuǎn)變，不僅使 小年齡兒童產(chǎn)生加強(qiáng)免疫反應(yīng)，而且對再次接種也能產(chǎn)生加強(qiáng)免疫反應(yīng)，由 此提高了疫苗的保護(hù)性能。

為此人們將PRP或其衍生物結(jié)合于一種蛋白載體(如白喉類毒素蛋白、 以減毒的白喉類毒素蛋白CPM197、破傷風(fēng)類毒素、腦膜炎奈氏菌外膜蛋白 復(fù)合物等)上使其轉(zhuǎn)變成T細(xì)胞依賴性多糖抗原來增強(qiáng)應(yīng)答，結(jié)合疫苗具有 很好的免疫原性。

近年來，由于抗菌素的濫用，B型流感嗜血桿菌(Hoemophilusinflu enzatypeb，Hib)感染已成為導(dǎo)致世界各地幼兒發(fā)病和死亡的一個(gè)主要原因， 每年約有30-50萬兒童死于Hib引起的腦膜炎和肺炎等疾病。

感染性疾病仍然嚴(yán)重威脅著世界人類的健康，尤其是導(dǎo)致嬰幼兒發(fā)病、 住院和死亡的重要原因。隨著科技的發(fā)展，新疫苗不斷地被研究和開發(fā)， 目前各個(gè)國家納人計(jì)劃免疫的疫苗種類也日益增多，中國自2008年開始， 將免疫規(guī)劃由原來的5苗防7病擴(kuò)大為l4苗防l5病。疫苗種類增多所帶來 的兒童接種次數(shù)增加和疫苗管理負(fù)荷增加等，使得研制聯(lián)合疫苗勢在必行。 目前國外的很多疫苗供應(yīng)商和一些國內(nèi)的疫苗企業(yè)都在致力于開發(fā)聯(lián)合疫 苗，其中以DTaP為基礎(chǔ)的聯(lián)合疫苗又是當(dāng)前開發(fā)的重點(diǎn)。

使用Hib疫苗是控制Hib侵襲性疾病的有效措施。Hib疫苗具有較好的 免疫原性,接種后可產(chǎn)生良好的免疫應(yīng)答,可誘發(fā)機(jī)體產(chǎn)生有效的保護(hù)性殺菌 抗體。

預(yù)防白喉、破傷風(fēng)和百日咳三種疾病的DTaP疫苗在中國嬰幼兒免疫接 種中已廣泛使用，預(yù)防嬰幼兒腦膜炎和肺炎等疾病的Hib結(jié)合疫苗已經(jīng)研制 成功并被納入地方擴(kuò)大免疫規(guī)劃中，這兩種疫苗免疫程序相同，目前國外已 有DTaP-Hib聯(lián)合疫苗商品問世，但國內(nèi)尚未研制成功DTaP-Hib聯(lián)合疫苗。

目前研制的Hib結(jié)合疫苗是安全有效的，在接種3劑后，90％-99％的 兒童會產(chǎn)生抗體。因此，WHO建議將Hib疫苗納入嬰幼兒常規(guī)免疫規(guī)劃。 另外，該疫苗與無細(xì)胞百白破疫苗(DTaP)具有相同的免疫程序，因此，研 制無細(xì)胞百白破B型流感嗜血桿菌聯(lián)合疫苗(DTaP/Hib)具有重大意義。 聯(lián)合疫苗開發(fā)的目的是在減少疫苗注射次數(shù)的同時(shí)預(yù)防更多種類的疾病。其 意義不僅可以提高疫苗覆蓋率和接種率、減少多次注射給嬰兒和父母所帶來 身體和心理的痛苦、減少疫苗管理上的困難、降低接種和管理費(fèi)用；還可減 少疫苗生產(chǎn)中必含的防腐劑及佐劑等劑量，減低疫苗的不良反應(yīng)等。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種B型流感嗜血桿菌莢膜多糖的制備方法及聯(lián)合疫 苗。

為達(dá)上述目的，本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中提供了一種B型流感嗜血桿菌莢膜 多糖的制備方法，包括以下步驟：

(1)發(fā)酵培養(yǎng)：將B型流感嗜血桿菌接種到發(fā)酵罐中發(fā)酵，并于對數(shù)生長 的后期或靜止期的前期終止培養(yǎng)，獲得培養(yǎng)液；

(2)滅菌沉淀：將培養(yǎng)液滅菌后高速離心，收集上清液，并在上清液中加 入十六烷基三甲基溴化銨充分混勻，然后靜置再離心，收集沉淀物；

(3)多糖提取和純化