[發明專利]一種羊鞏膜膠原蛋白的提取方法、眼用凝膠及其制備方法

在審

• 申請號: 201610076074.2
• 申請日: 2016-02-03
• 公開（公告）號: CN105617350A
• 公開（公告）日: 2016-06-01
• 發明（設計）人: 王媛
• 申請（專利權）人: 王媛
• 主分類號: A61K38/01
• 分類號: A61K38/01;A61K9/06;A61P27/10;A61K35/30
• 代理公司: 北京馳納智財知識產權代理事務所(普通合伙) 11367
• 代理人: 蔣路帆

1.一種羊鞏膜膠原蛋白眼用凝膠，其特征在于：包括羊鞏膜膠原蛋白、硼 酸、硼砂、聚乙烯醇、氯化鈉、吐溫、注射用水、防腐劑；其中，羊鞏膜 膠原蛋白的質量分數為80％～90％，防腐劑的質量分數為0.01％～2％，硼 酸和硼砂的質量分數為0.5％～2％，聚乙烯醇的質量分數為0.5％～2％，氯 化鈉的質量分數為0.5～2％，吐溫質量的分數為0.3％～2％，注射用水的質 量分數為余量。

2.如權利要求1所述的羊鞏膜膠原蛋白眼用凝膠，其特征在于，所述羊鞏膜 膠原蛋白的提取方法包括以下步驟：

1)將離體的羊眼球去除鞏膜以外的其他部分，分離出羊鞏膜；

2)將步驟1)中得到的羊鞏膜切成羊鞏膜片；用生理鹽水浸泡清洗羊鞏膜 片，去除血清和脂肪后，用蒸餾水漂洗，在無菌環境下晾干，得到羊鞏 膜干片；

3)取所述羊鞏膜干片，加入胃蛋白酶，所述胃蛋白酶的質量為羊鞏膜干片 質量的10％，放入勻漿機內進行勻漿后，放在磁力攪拌機上攪拌提取 24h～26h；

4)用高速冷凍離心機在溫度為0～4℃，轉速為6000轉/min的條件下離心 10～30min，取第一次上清溶液，并得到沉淀；

5)將步驟4)中離心得到的沉淀加入0.5mol/L乙酸懸浮溶解，放在磁力攪 拌機上攪拌提取24h～26h，用高速冷凍離心機在溫度為0～4℃，轉速 為6000轉/min的條件下離心10～30min，取第二次上清溶液；

6)合并所述第一次上清溶液和所述第二次上清溶液，緩慢加入堿性溶液調 節pH值至5，濾掉沉淀物，在剩余的溶液中加入氯化鈉固體粉末，緩 慢攪拌，在4℃下，靜置8～14小時形成羊鞏膜膠原蛋白原液；

7)將羊鞏膜膠原蛋白原液放置于高速冷凍離心機中，在溫度為0～4℃， 轉速為6000轉/min，時間為10～30min的條件下離心，取沉淀，用稀 醋酸溶解，將溶解液裝入透析袋中，分別用梯度濃度的乙酸溶液各透析 24～26小時，然后用蒸餾水透析24～26小時，每24～26小時更換透 析液兩次，得到羊鞏膜膠原蛋白水溶液；

8)將羊鞏膜膠原蛋白水溶液在-20℃～-80℃下冷凍干燥，制得到羊鞏膜膠 原蛋白。

3.如權利要求2所述的羊鞏膜膠原蛋白眼用凝膠，其特征在于，步驟6)中所 述堿性溶液為6mol/L的NaOH或6mol/L的KOH。

4.如權利要求1所述的羊鞏膜膠原蛋白眼用凝膠，其特征在于：所述聚乙烯 醇為增稠劑，所述硼酸、硼砂為離子緩沖對，所述氯化鈉為滲透壓調節 劑，所述吐溫為增溶劑，所述吐溫為吐溫-80，所述防腐劑為羥苯乙酯、對 羥基苯甲酸丙酯或苯扎溴銨。

5.一種如權利要求1所述的羊鞏膜膠原蛋白眼用凝膠的制備方法，其特征在 于：該方法在無菌條件下進行，其制作步驟是：

1)取質量分數為0.5％～2％的硼酸和硼砂、質量分數為0.5％～2％的聚乙烯 醇，質量分數為0.5％～2％的氯化鈉，質量分數為0.3％～2％的吐溫，質量 分數為0.01％～2％的防腐劑、質量分數為80％～90％的羊鞏膜膠原蛋白， 以及余量的注射用水備用；

2)稱取硼酸、硼砂、苯扎溴銨溶于75～85℃的注射用水中，加吐溫，攪 勻；

3)另取羊鞏膜膠原蛋白溶于聚乙烯醇中，加入上述溶液，邊加邊攪拌，混 合均勻，放冷，用微孔濾膜為孔徑0.22μm的濾膜過濾，自濾器上添加注射 用水，經100℃流通蒸汽滅菌30min，無菌分裝制成羊鞏膜膠原蛋白眼用凝 膠。

6.如權利要求5所述的羊鞏膜膠原蛋白眼用凝膠的制備方法，其特征在于： 所述羊鞏膜膠原蛋白眼用凝膠為白色凝膠狀，PH值為6.5～7.4。

7.如權利要求5所述的羊鞏膜膠原蛋白眼用凝膠的制備方法，其特征在于： 所述聚乙烯醇為增稠劑，所述硼酸、硼砂為離子緩沖對，所述氯化鈉為滲 透壓調節劑，所述吐溫為增溶劑，所述吐溫為吐溫-80，所述防腐劑為羥苯 乙酯、對羥基苯甲酸丙酯或苯扎溴銨。